24小时热门版块排行榜    

查看: 2067  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

xulanzzz

金虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】重叠PCR的问题??? 已有1人参与

大家好,这个是重叠PCR的步骤:请问里面的第5)步的延伸都需要添加什么??
1)  以引物A/B进行PCR1;
2)  以引物C/D进行PCR2;
3)  引物B/C中引入了需要的限制性位点;
4)  混合二者PCR产物,混合以前最好回收一下;
5)  进行PCR延伸反应,1-5个循环即可。
6)  以延伸反应的产物为模板,以A/D为引物进行PCR;
7)  产物即为所需最终产物。

[ Last edited by xulanzzz on 2010-10-11 at 13:05 ]
回复此楼
DOBEST
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hongchenlyan

金虫 (小有名气)

我曾经做过,是删除一段序列,设计B/C引物基本一致,跨所要删的序列,1)2)步骤一致,然后分别回收产物,大致等量混合后,以A/D为引物进行PCR获得终产物。
3楼2010-10-11 11:12:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

jasco

木虫 (正式写手)

互为模板延伸,但是“只有右面”就不懂指哪个
2楼2010-10-11 10:50:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xulanzzz

金虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by jasco at 2010-10-11 10:50:31:
互为模板延伸,但是“只有右面”就不懂指哪个

这个本来下面有一个图说明,但是图粘贴不上。请问延伸的反应要不要添加聚合酶?
DOBEST
4楼2010-10-11 11:50:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xulanzzz

金虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by hongchenlyan at 2010-10-11 11:12:48:
我曾经做过,是删除一段序列,设计B/C引物基本一致,跨所要删的序列,1)2)步骤一致,然后分别回收产物,大致等量混合后,以A/D为引物进行PCR获得终产物。

重叠PCR有两种做法,你说的是其中一种,即模板等量混合之后进行常规PCR,还有另一种是先进行5个循环的延伸,然后添加引物进行PCR。
DOBEST
5楼2010-10-11 11:57:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +7 scalable 2026-08-24 7/350 2026-08-24 23:01 by anata1209
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +7 图啦图啦 2026-08-24 8/400 2026-08-24 22:00 by maomao_da
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 5/250 2026-08-24 21:51 by BZKMTicpDhFj
[基金申请] 我面上完蛋了 +9 且听虎啸 2026-08-20 10/500 2026-08-24 20:08 by 苦寒来香
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤?
[基金申请] 估计是周四 +4 archvillain 2026-08-18 4/200 2026-08-24 13:53 by zzuzxg
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +6 炎黄贵胄 2026-08-22 7/350 2026-08-24 11:58 by 6543yes
[基金申请] 朋友圈看到的 +7 wangzilk 2026-08-18 9/450 2026-08-24 10:50 by cmrandy
[基金申请] 让我中一个面上吧! +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 17/850 2026-08-24 10:20 by echo8914667
[基金申请] 明天应该可查了!? +4 chengyan1220 2026-08-23 4/200 2026-08-24 08:47 by gloomy6159
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
信息提示
请填处理意见