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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】蛋白纯化后可不可以不除咪唑直接送公司做抗体
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zhangpeipei

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】蛋白纯化后可不可以不除咪唑直接送公司做抗体 已有3人参与

请问，
我纯化的重组蛋白保存到缓冲液中，其中含有50mM的NaH2PO4,300mMNacl以及250mM的咪唑当中，PH为8.0。
可是我在透析除咪唑的时候蛋白出现了沉淀，暂时无法解决，请问我们可不可以直接将未透析的蛋白溶液直接发给公司制备抗体，如果是蛋白沉淀的话是否可以直接做抗体。 先谢谢各位了！
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1楼 2010-10-07 13:26:23
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2):鼓励交流！ 2010-10-07 16:39:19
如果不透析是可以直接做抗体，但是可能兔子会有反应或者没有反应，兔子听超耐受的
但是透析之后出现沉淀，那说明蛋白变性了。你可以离心去除沉淀之后看下上清中蛋白浓度还有多少。然后你需要的抗体是针对线性表位的还是空间表位的。如果要是线性表位的话沉淀了也是可以免疫的。但是空间表位的话 那就不需要沉淀部分。
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52187644
3楼2010-10-07 16:06:54
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lwh_xp

木虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+3):鼓励分享经验！ 2010-10-07 16:39:29
我的情况和你一样，在浓缩时蛋白发生沉淀，可以建议你一下：1.直接打兔子老鼠（我就是这么干的，影响不大）；2.跑完SDS-PAGE后，切胶，捣碎之后直接用于做抗体。
赞一下(2人) 回复此楼
xp是坏蛋！
4楼2010-10-07 16:19:03
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