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塞外雨

金虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】点突变已有9人参与

我想对已构建好的质粒进行点突变,突变点已经设计到引物上,用普通的taq酶P,再用Dpn I消化,直接转化,能行吗?还是 必须用Pfu酶P,才行。
主要就是taq在3端加了一个A
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只想找到关心我、在我犹豫时能给我判断的人
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evan1987

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
为了保真,建议是把目的片段酶切下来再连接载体。毕竟载体很大,P的时候可能会有错误。
8楼2010-09-07 11:07:14
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snowice

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab:KOD plus,有这么好吗? 2010-09-06 23:52:30
不是加不加a的问题,taq突变太高啊,pfu也不值得信任,拿去测序发现有问题多得不偿失啊,推荐用KOD plus,10K都没啥问题
爱吃爱睡懒得要死的猪头
2楼2010-09-06 13:08:02
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evan1987

铜虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-09-06 23:52:36
pfu足够了,消化后把目的基因酶切下来再重新连接,这样比较省钱啊。
3楼2010-09-06 23:07:30
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snowice

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
pfu的保证性还行,但也比KOD差不少,最主要它扩增能力不好
ps:为啥还要消化后酶切再连接啊,消化完直接转化不就完了?
引用回帖:
Originally posted by evan1987 at 2010-09-06 23:07:30:
pfu足够了,消化后把目的基因酶切下来再重新连接,这样比较省钱啊。

爱吃爱睡懒得要死的猪头
4楼2010-09-07 00:09:22
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