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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】如何选择ISSR引物
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jessiew000

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】如何选择ISSR引物

　　我是新手，正在看文献和准备做ISSR，DNA已经提取好了，也知道有100个引物可以直接购买，但是不知道应该如何选择。我觉得好像没必要把全部引物都买回来吧。希望有人帮我解决一下选择引物的问题。到底选择多少引物比较合适，如何选择引物。谢谢！
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不断努力~~~
1楼 2010-09-05 16:36:45
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66suyuan

木虫 (正式写手)
jessiew000(金币+1): 2010-09-06 09:06:23
似乎要一个一个筛选哇
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2楼2010-09-05 17:04:12
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欣晴5832

金虫 (小有名气)
jessiew000(金币+1): 2010-09-06 09:06:16
查一下近缘种的ISSR引物，没有必要一个个筛
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3楼2010-09-05 17:22:34
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jessiew000

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 欣晴5832 at 2010-09-05 17:22:34:
查一下近缘种的ISSR引物，没有必要一个个筛

如果找不到近缘种怎么办啊？
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不断努力~~~
4楼2010-09-06 09:07:09
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欣晴5832

金虫 (小有名气)
jessiew000(金币+1): 2010-09-07 19:48:59
多看看这方面文献，从亲缘关系最近的开始找，依次往远。
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5楼2010-09-06 13:15:58
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小小豆豆

金虫 (小有名气)
jessiew000(金币+1): 2010-09-07 19:49:06
要一个个的筛选，一共就那么多引物，不怎么费事的，呵呵，想当初在实验室做课题时，一筛选就是一二百对引物。
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6楼2010-09-06 13:28:45
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小凡198807

木虫 (小有名气)
★ ★
silicare(金币+2):谢谢分享 2010-10-13 11:46:00
issr有常用的一套引物可以使用啊，我记得是64对，你可以从里面筛选出来，多查下研究生硕士论文，上面会描述的比较详细，我做SSR的，ISSR技术含量太低，做了比较难毕业。
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7楼2010-10-13 11:33:51
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zjx4700

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
看人家做的ISSR条带那么多，PCR一次是加一次多少引物啊。引物是怎么加的啊，我老师准备让我做ISSR，最近要订引物，对这方面没有了解，望有高手指导。
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油菜农业家！
8楼2011-05-13 09:31:58
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sfb1020

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
只能一个一个试了，不过可以先试试其他物种的核心引物
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9楼2011-05-13 09:50:55
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疯狂修行者

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by zjx4700 at 2011-05-13 09:31:58:
看人家做的ISSR条带那么多，PCR一次是加一次多少引物啊。引物是怎么加的啊，我老师准备让我做ISSR，最近要订引物，对这方面没有了解，望有高手指导。

你先去查文献，中文和外文的都要查全了，看别人有没有做过你这个物种的，如果有的话，把他们的引物拿来用。但是最好的办法就是100条全筛选一遍，不过你可以在相关文献上查出每条引物的最适退火温度或者选用一个温度也行。初期筛选时，可以只选择几个模板，如果选择3个模板，选择一个温度的话，也只不过300个PCR，4次PCR就做完了，很快的。如果要筛选最适退火温度，也不难，顶多2400个PCR就够了，我就这么搞的。你最好准备一把排枪，点样和加模板时就快了，我一星期就筛完引物了。祝你实验顺利！！
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戒骄戒躁，坦荡做人，平常心做事，享受生活之美！！
10楼2011-05-13 10:23:38
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