| 查看: 634 | 回复: 2 | |||
linxi8579铜虫 (正式写手)
|
[交流]
【求助/交流】overlapping PCR
|
| 哪位大侠指点一下overlapping PCR的相关注意问题啊，我用cDNA做模板短的可以就是长的我都要绝望了。只好试一下overlapping PCR了，从引物设计到具体的protocal都想请教一下，多谢了。 |
回复此楼» 猜你喜欢
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
-
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗
已经有25人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有251人回复
-
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈
已经有0人回复
-
RO4929097 解析：双苯并氮杂䓬骨架与 Notch 通路实验设计要点
已经有0人回复
-
分子量 1157 的 PROTAC 怎么配不析出：SGK3-PROTAC1 的溶解、分装与图谱复核
已经有0人回复
-
logP 6.1 的羧酸怎么配母液：GSK 650394 的溶解窗口与稀释顺序
已经有0人回复
-
从"水不溶"到 71 mg/mL：雷特格韦的 pH 依赖溶解与螯合色谱边界
已经有0人回复
-
133 Ų 的极性表面积，如何决定 TNG462 的母液配制与色谱条件
已经有0人回复
-
两个氟原子与一段氨基甲酸甲酯：BLU-5937 的母液配制与稳定性边界
已经有0人回复
-
司美那非（TPN171）：从嘧啶酮母核到工艺放大的结构、色谱与质控参数解析
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- overlap PCR做不出来呐。。。。
已经有23人回复
- 融合pcr怎么总是不成功啊
已经有9人回复
- 求三句英语翻译
已经有5人回复
- 生物学四句翻译
已经有1人回复
- 【求助/交流】求多位点突变的技巧及步骤
已经有6人回复
- 测序关于碱基的确定
已经有7人回复
huainianshili
金虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 168.2
- 散金: 311
- 红花: 6
- 帖子: 711
- 在线: 59.4小时
- 虫号: 454523
- 注册: 2007-11-09
- 专业: 微生物生理与生物化学
★ ★ ★ ★ ★
scelab(金币+5):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-09-02 22:58:49
linxi8579(金币+5): 2010-09-03 11:09:06
scelab(金币+5):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-09-02 22:58:49
linxi8579(金币+5): 2010-09-03 11:09:06
|
酶先试pyrobest。不行再用LA taq overlap 我用50nt 每个引物各分25nt加在5端。 一定用nest pcr 用两步法 两翼引物tm大于60度 按照这样 扩3.5kb以下的基本一次成功。4kb 以上的可能需要优化mg和退火温度。 以下文献最为关键： Shevchuk, N. A., A. V. Bryksin, et al. (2004). "Construction of long DNA molecules using long PCR-based fusion of several fragments simultaneously." Nucl. Acids Res. 32(2): e19-. |
2楼2010-09-02 22:18:24
taishanwei
铁虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 345.6
- 红花: 1
- 帖子: 48
- 在线: 36.7小时
- 虫号: 970920
- 注册: 2010-03-14
- 专业: 生物大分子结构与功能
3楼2010-09-02 22:24:57
10