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lhm_hnyj

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】测序结果整不明白 已有7人参与

分子生物学新手有问题请教哈。
真菌ITS通用引物PCR产物送公司克隆测序,载体为Takara的PMD-18T,序列之一TTCGAaTTCGAGCTCGGTACCCGGGGATCCTCTAGAGATTACCGGTGGTAGCCCTGAACCCGGCTACACTGCTCCCACTGCCTGAGGAAGGGCTGCAACACAACTGCCTTGATATCCTGGCCGAAGCCCACGGAACCCGACCCGACCTAGCGGACCAGCCGCTCCCAGACGCCGACCACACCTGGTACACGGATGGAAGCAGTCTCTTGCAAGAGGGACAGCGTAAGGCGGGAGCTGCGGTGACCACCGAGACCGAGGTAATCTGGGCTAAAGCCCTGCCAGCCGGGACATCCGCTCAGCGGGCTGAACTGATAGCACTCACCCAGGCCCTAAGGATGGCAGAAGGTAAGAAGCTAAATGTTTATACTGATAGCCGTTATGCTTTTGCTACTGCCCATATCCATGGAGAAATATACAGAAGGCGTGGGTTGCTCACATCAGAAGGCAAAGAGATCAAAAATAAGGACGAGATCTTGGCCCTACTAAAAGCCCTCTTTCTGCCCAAAAGACTTAGCATAATCCATTGTCCAGGACATCAAAAGGGACACAGCGCCGAGGCTAGAGGCAACCGGATGGCTGACCAAGCGGCCCGAAAGGCAGCCATCACAGAGAATCCAGACACCTCTACCCTCCTCATAGAAAATTCATCGCCCAATTCCCGCTTAATTATTCATCACCATCATCACCATTAATAAGCTTGGCTGTTTTGGCGGATGAGAGAAGATTTTCAGCCTGATACAGATTAAATCAGAACGCAGAAGCGGTCTGATAAAACAGAATTTGCCTGGCGAATCGTCGACCTGCAGGCATGCAAGCTTGGCACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGACTGGGAAAACCCTGGCGTTACCCAACTTAATCGCCTTGCAGCACATCCCCCTTTCGCCAGCTGGCGTAATAGCGAAGAGGCCCGCACCGATCGCCCTTCCCAACAGTTGCGCAGCCTGAATGGCGAATGGCGCCTGATGCGGTATTN
直接去NCBI比对没有想要的结果,是该先去掉某段吗?请大家谁帮忙分析下哈。谢谢了。还有,抱歉的是不知道测序图怎么贴上来,所以没法给大家看图
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xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
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scelab(金币+2):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-08-27 23:49:26
去宝生物网站下载pMD18-T-vector的说明书,测序引物在插入片段的上游多少bp开始就可以看出来了。不过我基本上都是从第70bp开始,因为从测序峰上看第70bp开始比较好了
2楼2010-08-27 23:14:24
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jukongka

铁杆木虫 (著名写手)

年度最忠心木虫

★ ★
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lstt09nk(金币+1):鼓励交流~~ 2010-08-28 09:06:45
应该去打掉克隆载体的序列,你的ITS系列为:
ACCGGTGGTAGCCCTGAACCCGGCTACACTGCTCCCACTGCCTGAGGAAGGGCTGCAACACAACTGCCTTGATATCCTGG
CCGAAGCCCACGGAACCCGACCCGACCTAGCGGACCAGCCGCTCCCAGACGCCGACCACACCTGGTACACGGATGGAAGC
AGTCTCTTGCAAGAGGGACAGCGTAAGGCGGGAGCTGCGGTGACCACCGAGACCGAGGTAATCTGGGCTAAAGCCCTGCC
AGCCGGGACATCCGCTCAGCGGGCTGAACTGATAGCACTCACCCAGGCCCTAAGGATGGCAGAAGGTAAGAAGCTAAATG
TTTATACTGATAGCCGTTATGCTTTTGCTACTGCCCATATCCATGGAGAAATATACAGAAGGCGTGGGTTGCTCACATCA
GAAGGCAAAGAGATCAAAAATAAGGACGAGATCTTGGCCCTACTAAAAGCCCTCTTTCTGCCCAAAAGACTTAGCATAAT
CCATTGTCCAGGACATCAAAAGGGACACAGCGCCGAGGCTAGAGGCAACCGGATGGCTGACCAAGCGGCCCGAAAGGCAG
CCATCACAGAGAATCCAGACACCTCTACCCTCCTCATAGAAAATTCATCGCCCAATTCCCGCTTAATTATTCATCACCAT
CATCACCATTAATAAGCTTGGCTGTTTTGGCGGATGAGAGAAGATTTTCAGCCTGATACAGATTAAATCAGAACGCAGAA
GCGGTCTGATAAAACAGAATTTGCCTGGCGAA
3楼2010-08-28 01:25:06
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怎么都行

银虫 (小有名气)


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LZ测序前做过菌落PCR鉴定没有,要是不幸测了个阴性菌落那测序结果就是空质粒的,BLAST就比对不出结果来。
4楼2010-08-28 11:45:49
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月月大可

木虫 (著名写手)

测序有些时候使用的是下游引物,需要你转化为反向互补序列才是你的目的序列真面目。
5楼2010-08-28 15:29:11
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guoxingjun2008

金虫 (正式写手)


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如果是单向测序的话,要注意有的时候需要反向互补一下,然后再比对即可!
6楼2010-08-28 16:53:29
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lhm_hnyj

金虫 (小有名气)

谢谢大家热心帮忙,我多方试试看
7楼2010-08-30 08:29:23
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fayzhao

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
1988645楼: Originally posted by guoxingjun2008 at 2010-08-28 16:53:29
如果是单向测序的话,要注意有的时候需要反向互补一下,然后再比对即可!

你好,我的测序结果是与目的基因序列反向互补的,如果这样的话,还能往后做提质粒、双酶切、表达吗?O(∩_∩)O谢谢
8楼2012-11-22 17:18:22
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