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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】大家帮忙看看我这个筛退火温度的图，总是拖带
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swul_benben

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】大家帮忙看看我这个筛退火温度的图，总是拖带 已有4人参与


其中的有几个总是拖带，升温以后条带逐渐变虚，但还是拖带，降温就是更亮点，总之就是不能单一的条带，我的DNA是稀释的10倍然后用PCR扩增了，这DNA的质量估计不是太好，所以稀释的倍数不多，有高手能帮帮忙看是怎么个情况啊。。
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1楼 2010-08-25 17:16:10
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vivihao

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+3):鼓励交流！ 2010-08-25 20:35:11
降低Mg2+浓度，降低循环数，还有LZ引物前面加了一些碱基了没？如酶切位点接头等，若加了的话，前几个循环不算附加的碱基，后几个循环加上附加的碱基算Tm值。
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5楼2010-08-25 20:27:40
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swul_benben

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by jasco at 2010-08-25 17:37:28:
试试touch down

用过降落PCR了，但是降落pcr如果跑出来没有拖带应该怎样确定温度呢，只是一个范围，而且降落PCR也是防止非特异性扩增的啊，依然没法确定退火温度。
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3楼2010-08-25 19:33:38
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大白菜123789

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
换个酶试试，有时候拖尾与酶也有一定的关系
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4楼2010-08-25 19:52:41
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