应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】从蛋白胶里回收蛋白
171/2返回列表12下一页
查看: 2401  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

芝之

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】从蛋白胶里回收蛋白 已有7人参与

如题，该如何操作呢，请有经验的战友们介绍下
3Q~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-08-17 11:25:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cpn

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-08-17 16:26:33
偶自己没做，不过看偶的师弟折腾了好几个月，看lz后面的目的是要干什么了咯~~
是SDS-PAGE中回收的话，SDS的除去很重要，如果是要MS分析的话。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-08-17 14:53:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

芝之

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by cpn at 2010-08-17 14:53:30:
偶自己没做，不过看偶的师弟折腾了好几个月，看lz后面的目的是要干什么了咯~~
是SDS-PAGE中回收的话，SDS的除去很重要，如果是要MS分析的话。

我想做非变性电泳，然后条带回收，具体是怎么操作的呢，是透析袋什么的么？
赞一下 回复此楼
3楼2010-08-17 15:44:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sqhnsd

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+3):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-08-17 16:26:43
引用回帖:
Originally posted by 芝之 at 2010-08-17 15:44:55:


我想做非变性电泳，然后条带回收，具体是怎么操作的呢，是透析袋什么的么？

如果非变性的话，就不能用电洗脱了，因为你不能加电泳液进去，也就是不能接触SDS。你可以考虑扩散的方法将蛋白从胶中提出来（切碎胶，加入10倍胶体积的buffer,震荡过夜，回收率可能只有30%左右，这个胶不能染，染了之后蛋白沉淀在胶里面，很难出来）
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2010-08-17 15:52:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

芝之

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by sqhnsd at 2010-08-17 15:52:55:

如果非变性的话，就不能用电洗脱了，因为你不能加电泳液进去，也就是不能接触SDS。你可以考虑扩散的方法将蛋白从胶中提出来（切碎胶，加入10倍胶体积的buffer,震荡过夜，回收率可能只有30%左右，这个胶不能染， ...

非常感谢，我还是想问，如果我用电泳液不加SDS会怎么样
赞一下 回复此楼
5楼2010-08-17 16:36:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sqhnsd

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 芝之 at 2010-08-17 16:36:17:


非常感谢，我还是想问，如果我用电泳液不加SDS会怎么样

跑不动。SDS-PAGE之所以能跑，就是因为SDS-Protein complex带负电荷。你查一些native gel的方法，可以不用加SDS，但是需要加一些别的东西是蛋白带上电荷才能在胶里面运动。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2010-08-17 16:46:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

芝之

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by sqhnsd at 2010-08-17 16:46:46:

跑不动。SDS-PAGE之所以能跑，就是因为SDS-Protein complex带负电荷。你查一些native gel的方法，可以不用加SDS，但是需要加一些别的东西是蛋白带上电荷才能在胶里面运动。

原来原理是这个，那那个用扩散的方法的，就是弄碎一些，然后震荡过夜，第二天离心去沉淀就可以了吧
赞一下 回复此楼
7楼2010-08-17 16:50:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sqhnsd

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 芝之 at 2010-08-17 16:50:09:

原来原理是这个，那那个用扩散的方法的，就是弄碎一些，然后震荡过夜，第二天离心去沉淀就可以了吧

能冻干吗？沉淀之后你还要损失好多呢？至少40%的蛋白要损失掉，越稀损失越多
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2010-08-17 17:42:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

芝之

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by sqhnsd at 2010-08-17 17:42:43:

能冻干吗？沉淀之后你还要损失好多呢？至少40%的蛋白要损失掉，越稀损失越多

实验室可以冻干，可是直接冻干的话，会参杂着胶的东西么？
赞一下 回复此楼
9楼2010-08-17 18:02:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sqhnsd

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 芝之 at 2010-08-17 18:02:11:

实验室可以冻干，可是直接冻干的话，会参杂着胶的东西么？

先离心，去除胶，然后搜集上清冻干
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2010-08-17 18:28:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 芝之 的主题更新
171/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 3/150 2026-09-06 13:09 by eObJPa4gWmp6
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 4/200 2026-09-06 12:49 by eObJPa4gWmp6
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 4/200 2026-09-06 12:29 by eObJPa4gWmp6
[找工作] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 7/350 2026-09-06 11:40 by eObJPa4gWmp6
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 7/350 2026-09-06 11:20 by eObJPa4gWmp6
[基金申请] 科研人应该花精力去思考如何解决问题，而不是去凝练问题 +10 瞬息宇宙 2026-09-01 19/950 2026-09-06 11:15 by jiangxuan2004
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 8/400 2026-09-06 11:09 by eObJPa4gWmp6
[教师之家] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 8/400 2026-09-06 11:00 by eObJPa4gWmp6
[论文投稿] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-04 8/400 2026-09-06 11:00 by eObJPa4gWmp6
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 4/200 2026-09-06 07:20 by E1iiBLMU2XnD
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +6 7ZYIEW2YWn72 2026-09-04 9/450 2026-09-06 06:00 by E1iiBLMU2XnD
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +8 CRJ0Aq2FtVH0 2026-09-03 15/750 2026-09-06 05:48 by E1iiBLMU2XnD
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 5/250 2026-09-06 02:39 by E1iiBLMU2XnD
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 5/250 2026-09-06 02:19 by E1iiBLMU2XnD
[基金申请] 面上没中，邀请各位路过的虫友分析一下分数 +12 jackleilei 2026-09-03 13/650 2026-09-05 18:10 by fireguard
[文学芳草园] 两块石头 +6 阿美_Lml888 2026-09-03 8/400 2026-09-05 13:52 by 阿美_Lml888
[博后之家] 广西大学-广州大学招聘博士后 欢迎广大优秀人才！！！ +4 SCSIOyxguo 2026-09-03 7/350 2026-09-05 10:39 by Honglianlian
[硕博家园] Ei源刊怎么投 +4 Fengshun9711 2026-09-04 4/200 2026-09-04 19:30 by 研途知予
[硕博家园] 哈尔滨工业大学韩晓军教授课题组招收2027年硕士推免生及博士研究生 +3 灯灯灯灯DDDD 2026-09-03 3/150 2026-09-03 21:22 by 科研皮皮猪
[基金申请] 要骂人了，新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西，结果有个评委还在说凝练得不够 +9 瞬息宇宙 2026-08-31 17/850 2026-09-02 14:04 by anjeeshine
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭