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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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芝之

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】从蛋白胶里回收蛋白 已有7人参与

如题,该如何操作呢,请有经验的战友们介绍下
3Q~
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sqhnsd

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 芝之 at 2010-08-17 16:36:17:


非常感谢,我还是想问,如果我用电泳液不加SDS会怎么样

跑不动。SDS-PAGE之所以能跑,就是因为SDS-Protein complex带负电荷。你查一些native gel的方法,可以不用加SDS,但是需要加一些别的东西是蛋白带上电荷才能在胶里面运动。
6楼2010-08-17 16:46:46
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cpn

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+2):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-08-17 16:26:33
偶自己没做,不过看偶的师弟折腾了好几个月,看lz后面的目的是要干什么了咯~~
是SDS-PAGE中回收的话,SDS的除去很重要,如果是要MS分析的话。
2楼2010-08-17 14:53:30
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芝之

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by cpn at 2010-08-17 14:53:30:
偶自己没做,不过看偶的师弟折腾了好几个月,看lz后面的目的是要干什么了咯~~
是SDS-PAGE中回收的话,SDS的除去很重要,如果是要MS分析的话。

我想做非变性电泳,然后条带回收,具体是怎么操作的呢,是透析袋什么的么?
3楼2010-08-17 15:44:55
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sqhnsd

金虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+3):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-08-17 16:26:43
引用回帖:
Originally posted by 芝之 at 2010-08-17 15:44:55:


我想做非变性电泳,然后条带回收,具体是怎么操作的呢,是透析袋什么的么?

如果非变性的话,就不能用电洗脱了,因为你不能加电泳液进去,也就是不能接触SDS。你可以考虑扩散的方法将蛋白从胶中提出来(切碎胶,加入10倍胶体积的buffer,震荡过夜,回收率可能只有30%左右,这个胶不能染,染了之后蛋白沉淀在胶里面,很难出来)
4楼2010-08-17 15:52:55
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