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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】如何制备干净的包涵体
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zsm0507

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】如何制备干净的包涵体 已有2人参与

包涵体洗涤之后，离心发现没有沉淀了，而且洗涤液体中有目标蛋白。洗涤液含有1M尿素。而且每次超声洗涤的包涵体感觉都不干净，超声太久，会变黑，超声少了包涵体又有很多杂带，请教高手指点下！
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1楼 2010-08-12 15:25:32
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cheo163

金虫 (小有名气)
是不是你收集到的包涵体太少了~~
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2楼2010-08-12 15:33:53
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wordsworth3180

木虫 (正式写手)
试试盐酸胍呢？
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3楼2010-08-12 15:48:29
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jasco

木虫 (正式写手)
★ ★
amisking(金币+2):鼓励交流！ 2010-08-12 19:56:23
zsm0507(金币+1): 2010-08-25 16:48:00
1M尿素就能全部溶解，那么建议你用更低浓度的梯度来做溶解预实验，比如250mM，500mM，750mM尿素，然后分别电泳上清和沉淀，看看在那个情况下包涵体最纯。
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4楼2010-08-12 16:12:00
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zsm0507

金虫 (小有名气)
包涵体洗不干净，不知道怎么回事？
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5楼2010-08-13 09:41:41
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cheo163

金虫 (小有名气)
★ ★
lstt09nk(金币+2):很有道理的哦~~ 2010-08-13 18:40:48
zsm0507(金币+2): 2010-08-25 16:48:16
引用回帖:
Originally posted by zsm0507 at 2010-08-13 09:41:41:
包涵体洗不干净，不知道怎么回事？

1M的尿素洗不掉包涵体，除非你的根本没有形成致密的包涵体结构
看一下你的蛋白是否可溶性表达
我通常用的2M尿素去洗，都不会把包涵体给洗没了
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6楼2010-08-13 13:19:58
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bunny0512

银虫 (小有名气)
zsm0507(金币+1): 2010-08-25 16:48:30
为什么要用尿素洗涤?我们用PBS,洗涤5-6次,可得到灰白色比较纯的包涵体.黑色的为色素,不好除去.
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在哪里~在哪里见过你~
7楼2010-08-13 13:51:05
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zsm0507

金虫 (小有名气)
lstt09nk:你要是想针对楼上的回复进行讨论的话，最好引用该帖子，这样楼上的，就能看见了~~ 2010-08-13 18:42:27
黑色的应该是碳化的吧。怎么能是色素呢？
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8楼2010-08-13 14:41:58
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jasco

木虫 (正式写手)
zsm0507(金币+1): 2010-08-31 09:02:02
引用回帖:
Originally posted by bunny0512 at 2010-08-13 13:51:05:
为什么要用尿素洗涤?我们用PBS,洗涤5-6次,可得到灰白色比较纯的包涵体.黑色的为色素,不好除去.

目的是让包涵体更纯
用不同浓度的尿素洗涤包涵体，然后分上清和沉淀跑page，就能确定出得到最纯的包涵体的尿素洗涤浓度。

另外，同意楼上的，黑色的是超声造成的碳化
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9楼2010-08-25 17:36:04
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马海云

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by jasco at 2010-08-25 17:36:04
目的是让包涵体更纯
用不同浓度的尿素洗涤包涵体，然后分上清和沉淀跑page，就能确定出得到最纯的包涵体的尿素洗涤浓度。

另外，同意楼上的，黑色的是超声造成的碳化...

亲，跑电泳后怎么确定洗干净了？
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10楼2014-07-18 10:04:35
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