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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】4% 多聚甲醛作为固定液的具体使用方法
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蜗牛VS蜗牛

捐助贵宾 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】4% 多聚甲醛作为固定液的具体使用方法 已有5人参与

24孔板中放入爬片后，加入细胞悬液，药物或者荧光物质处理；
24小时后，吸掉培养液，用PBS洗一遍！
然后就用4% 多聚甲醛固定吗？
还是先将小片取出放到载玻片上，然后再用4% 多聚甲醛固定？
我是要做爬片（一定要放到载玻片上的）用荧光显微镜观察FITC。
有这方面经验的多多指教！非常感谢。

同时拿我上次做实验的过程给大家看看
上次实验非常失败，白忙活了两天
小片放入24孔板，细胞常规传代操作，每孔接种细胞2万个
加入药物及荧光物质等处理细胞（特殊处理，在细胞悬液状态下处理的细胞）
24小时后细胞贴壁，吸掉培养液，PBS洗了3遍
取出小片入到载玻片就观察了。
没有使用4% 多聚甲醛固定液
取出小片到载玻片前用PBS洗了三遍，每遍只用了几秒时间
结果观察发现本底荧光较强，细胞数量比开始观察到的贴壁量明显减少
结果明显不能反应问题
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1楼 2010-07-26 17:29:12
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黄大牛

铜虫 (初入文坛)
??ing
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朝为田舍郎，暮登天子堂。将相本无种，男儿当自强。
2楼2010-07-26 19:10:44
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wufengjian

木虫 (正式写手)
蜗牛VS蜗牛(金币+10):谢谢，给的晚了。 2010-10-13 13:44:54
不用放到载玻片上固定，在孔板中直接加入4%多聚甲醛。静置15min，用PBS洗2遍就Ok了。
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3楼2010-07-26 20:35:54
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蜗牛VS蜗牛

捐助贵宾 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by wufengjian at 2010-07-26 20:35:54:
不用放到载玻片上固定，在孔板中直接加入4%多聚甲醛。静置15min，用PBS洗2遍就Ok了。

它的作用就是防止细胞被轻易的洗掉对吗？
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4楼2010-07-27 09:00:48
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蜗牛VS蜗牛

捐助贵宾 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by wufengjian at 2010-07-26 20:35:54:
不用放到载玻片上固定，在孔板中直接加入4%多聚甲醛。静置15min，用PBS洗2遍就Ok了。

http://wenku.baidu.com/view/6223644ac850ad02de804187.html
这里面是说把爬片取出后再固定的。
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5楼2010-07-28 14:20:02
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wufengjian

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢交流~ 2010-10-14 08:33:49
其实取不取出来应该都可以，取出来只不过多了一步操作。不取出来也不影响它的固定作用。我一般都是固定好染色完毕后最后在封片的前一步将盖玻片取出。
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6楼2010-10-13 23:05:44
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我本兽医

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
4%多聚甲醛，固定细胞，直接在24孔板里加就可以了
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2010-10-14 09:29:36
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cuijiaoyan

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
细胞里加多少多聚甲醛呢？
赞一下 回复此楼
一辈子没有多长，一定要活的有意义。
8楼2013-05-07 21:49:38
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