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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 【求助】{蛋白质测定相关问题
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黑色月光

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助】{蛋白质测定相关问题 已有9人参与

我现在在做酶解虾壳粉提取蛋白的实验，其酶解液将作为风味料反应的基液。
我先前一直用凯氏定氮法测定酶解液中蛋白含量，但结果发现加入酶和没加入酶的含氮量基本相同，我已排除加酶量、酶解时间以及所加入的酶的问题，这到底是怎么回事呢？是不是测定方法本身的问题？求高手解释，谢谢！
PS：也有师姐跟我说会不会是我的虾壳粉（虾头、虾壳、虾脚粉碎而成）因为前处理是低温（50~60度）烘干的，虾本身含有的酶没有被灭活的缘故。可是一个老师跟我说，烘5~6小时这么长时间，酶早就灭活了。



把昨天的补充一下：
今天，我让师姐用福林酚法测了一下，之前我做的处理是：5g虾粉：100ml缓冲液，分三组，第一组不加酶；第二组加复合蛋白酶，第三组加风味蛋白酶。蛋白酶添加量均为原料重量的0.2%，50度水解3小时，100度灭酶10min，离心取上清，均定容至100ml。师姐用我的料液稀释30倍后测得的吸光度是：第一组 0.513；第二组 0.525； 第三组 0.544       师姐说后面两个值与她之前做的差不多，但没有加酶的第一组数值却比她做过的高很多。她所用的虾粉前处理用过105度烘干，我的只是低温烘干，这么看来难道是我的原料前处理的关系吗？

[ Last edited by 黑色月光 on 2010-7-15 at 23:02 ]
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1楼 2010-07-14 23:57:20
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黑色月光

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 柳飞绵 at 2010-07-16 08:57:48:
灭活不灭活应该不影响凯氏定氮法的结果啊。我感觉可能酶加的太少了，方法存在误差，100g加0.2g酶，蛋白质含量才44.2左右，何况你才取了5g,才2.21g蛋白，其中酶的含量才0.01g。凯氏定氮法好像没有这个精度啊

不是酶作为蛋白质对于测定结果的影响，而是我觉得虾壳粉里面本身的酶对水解的过程起了干扰作用，使得不加酶水解得到的结果偏高，与另外添加酶的结果相差不大。。。
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9楼2010-07-18 04:40:21
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羡慕双眼皮

禁虫 (小有名气)
★
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本帖内容被屏蔽
3楼2010-07-15 11:25:12
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201103yxw

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
虾壳蛋白含量多少啊？你是怎么排除酶解时间这个因素的？
赞一下(1人) 回复此楼
学习，好学习，好好学习
4楼2010-07-15 17:35:55
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黑色月光

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 柳飞绵 at 2010-07-15 09:10:11:
你加了多少酶阿?

0.03%、0.06%、0.09%、0.12%、0.2%、0.4%、0.6%、0.8%的都试过。。。
赞一下 回复此楼
5楼2010-07-15 22:40:18
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