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xiaoru2010

[交流] 【求助/交流】RACE产物克隆菌液怎么检测 已有6人参与

不提质粒,直接用通用引物(M13)对菌液进行PCR能不能检测有没有连接上?如果可以,酶用一般的Taq就可以吗??谢谢!!
         昨天,用特异引物的扩增程序和体系做了一下,退火温度用50度,结果只有引物二聚体。我克隆的是RACE3‘和5’端RACE产物,长度为1200左右,有没有做过的,是不是要用race程序啊?

[ Last edited by xiaoru2010 on 2010-7-13 at 10:03 ]
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xiaoru2010

急求高人解答!!!!
8楼2010-07-13 10:04:19
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dfl204

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-07-07 10:27:56
就用载体自带的引物就可检测。
酶就用一般的Taq
2楼2010-07-07 10:09:50
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ben1147

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-07-07 10:44:04
当然可以用通用引物检测了

最好把菌液离心了,挑菌体做模板,培养基成分有时候抑制PCR

菌体沾一点就行,不要挑太多
5楼2010-07-07 10:42:52
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wzw04

铁杆木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
就和做普通的PCR一样的,只是模板由DNA换成菌液。
6楼2010-07-07 15:15:26
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