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三磷酸腺苷铁杆木虫 (职业作家)
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【求助/交流】同样分子量的蛋白，用Strip buffer来洗掉前一个再检测效果如何？ 已有3人参与
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我有4个蛋白要检测，分别是23、26、30、30kD 23和30我可以剪开，26、30我就没那么大信心了，而且还有两个是30 strip buffer我从来没用过，不知道效果到底如何 这几个蛋白的表达量都不低，所以也不怕strip的时候损失 就是不知道这样做出来的结果，是否还能看出表达差异的趋势？ 望有做过的虫友进来交流 100 mM ß-mercapto-ethanol, 2% SDS, 62.5 mM Tris-Cl pH 6.8： ß-mercaptoethanol 342 µl 20% SDS 5 ml Tris-Cl pH6.7 3.125 ml add H2O to 50 ml 这个是查到的比较常用的配方 |
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2楼2010-06-22 18:54:58
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自顶一个，我印象中有几位虫友是提到过stripping的 3楼2010-06-23 08:58:59
dianaofyezi
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4楼2010-06-23 10:25:31
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5楼2010-06-23 11:26:51
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lstt09nk(金币+2):感谢分享~~ 2010-06-24 15:21:33
lstt09nk(金币+2):感谢分享~~ 2010-06-24 15:21:33
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经师姐提醒，我拿昨天的膜（剪下含有β-actin区域）继续做了这样的实验： 昨天的膜经过Stripping和曝光，无条带 今天我再敷了一次二抗（之前没封闭），是CST的鼠二抗，1：1000 再次曝光，没有条带 证明：之前stripping是连同一抗都洗掉的 然后继续用丽春红染色几秒，发现显出了清晰的长得很像actin的条带，以及其他的蛋白条带，一条条很整齐 证明：stripping并没有洗掉很多已经结合到PVDF膜上的蛋白，只是洗掉了绝大部分的一抗二抗 完毕~~该配方不错~~~ |
6楼2010-06-24 11:40:13
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