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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

[交流] 【求助/交流】同样分子量的蛋白,用Strip buffer来洗掉前一个再检测效果如何? 已有3人参与

我有4个蛋白要检测,分别是23、26、30、30kD
23和30我可以剪开,26、30我就没那么大信心了,而且还有两个是30
strip buffer我从来没用过,不知道效果到底如何
这几个蛋白的表达量都不低,所以也不怕strip的时候损失
就是不知道这样做出来的结果,是否还能看出表达差异的趋势?
望有做过的虫友进来交流

100 mM ß-mercapto-ethanol, 2% SDS, 62.5 mM Tris-Cl pH 6.8:
ß-mercaptoethanol 342 µl
20% SDS 5 ml
Tris-Cl pH6.7 3.125 ml
add H2O to 50 ml

这个是查到的比较常用的配方
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

自顶一个,我印象中有几位虫友是提到过stripping的
3楼2010-06-23 08:58:59
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lstt09nk

铁杆木虫 (职业作家)

小堂

这个还真是有难度~~虽然不懂,帮顶~
坚持能无数次改变人生的风景,因为只要路是对的,就不怕远~~~
2楼2010-06-22 18:54:58
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)

三磷酸腺苷(金币+2):谢谢,我也顶多回收一次 2010-06-23 11:20:29
虽然文献上说strip buffer不会对后面的结果又影响,但是以前我们做过,第二个蛋白还好,到后面的蛋白效果就不是很好了。如果你实在没有办法分开,可以试试。
实验实验么,就是要多多实验才知道结果。
祝你好运!
52187644
4楼2010-06-23 10:25:31
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
lstt09nk(金币+2):希望你做完之后跟我们大家分享你的结果和经验~~期待中~~ 2010-06-23 12:42:38
今天用了楼顶那个配方做stripping
strip之前发光肉眼可见条带,之后肉眼不见发光,压片3分钟无任何条带、背景
但我还没做重新封闭再检测的步骤
懒,不做了,这次是拿了别人不要的拿来玩的
等下次做自己的样品的时候再试试
5楼2010-06-23 11:26:51
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