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【求助/交流】基因敲除问题已有5人参与
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| 做大肠杆菌的基因敲除，将目的基因敲掉了正在做抗性基因的反敲除。将以敲除目的基因的菌在摇管中42度培养保证pKD46丢失后电转如pCP20,做cm抗性基因的反敲除，37度在氨苄板上长菌，再将这些菌转接的另一氨苄板上也长（是不是可以证明pCP20以电转入？），然后将菌分别接入氨苄摇管和LB摇管，其中氨苄摇管37度培养，LB摇管42度培养，从氨苄摇管中提质粒，能提出就是pCP20， 证明pCP20转入了，LB摇管42度培养是为了诱导pCP20中的翻转酶表达并丢失。将于能提出质粒的氨苄摇管对应的菌在转接入氯霉素摇管结果发现也长了，这是为什么呐？按说42度足以是pCP20表达并丢失了但为什么就是反敲除不成功呐？还有，会不会是因为pKD46没有丢失，pCP20转不进去？做过这方便的大侠们请指点啊！谢谢了！！！！ |
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4楼2010-06-18 20:21:07