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woke2008

新虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】IPTG诱导剂的用量 已有5人参与

各位大虾,请问蓝白斑筛选IPTG诱导剂的用量是多少(不涂平板,直接加到培养基里面的)?
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忘记了该怎么忘记该怎么办!
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jasco

木虫 (正式写手)


1949stone(金币+1):正解 2010-06-12 11:47:45
woke2008(金币+1): 2010-06-13 13:25:10
最好从1mM开始尝试诱导表达,梯度可用:0.05mM,0.3mM,0.5mM,0.7mM,1mM,2mM,,,,,,摸索最佳用量
3楼2010-06-12 10:00:37
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liyong1981

金虫 (正式写手)


woke2008(金币+1): 2010-06-13 13:25:07
1就可以了哦~
4楼2010-06-12 11:47:07
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

woke2008(金币+2): 2010-06-13 13:24:59
首先把X-Gal配制成20 mg/ml的二甲基甲酰胺(DMF)溶液(-20℃避光保存),然后在100 ml的琼脂培养基中,加入200 μl的上述溶液、100 μl的IPTG(24 mg/ml)和100 μl的Amp(100 mg/ml),制作成X-Gal、IPTG、Amp平板培养基。当DNA片段插入至pUC系列载体(或其他带有lacZ、Amp基因载体),然后转化至lacZ缺失细胞中后,涂布上述的X–Gal、IPTG、Amp平板培养基,可根据长出菌体的蓝白色,而方便地挑选出基因重组体(白色为具有DNA插入片段的基因重组体)。
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
5楼2010-06-12 13:10:45
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