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xpb2005

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】有关GC Buffer的问题? 已有3人参与

我用TAKRA的GC Buffer 1进行PCR,说明书上建议50微升的体系, dNTP(各2.5mM)加了8微升,想知道为什么加这么多呢?不是很理解,望高手指点、
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ben1147

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+2):谢谢交流!:tiger06: 2010-06-11 23:21:20
dNTP能和Mg2+结合,如果体系中Mg2+浓度较高,就等于变相降低了dNTP浓度,所以要多加一点dNTP。

GC Buffer的Mg2+浓度比较高(没记错的话,TaKaRa的2X貌似是5mM,终浓度2.5mM),他家普通的Taq酶配的10X buffer是15mM,终浓度1.5mM。所以dNTP浓度相应高一点。
2楼2010-06-11 18:32:55
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
DNTP 加那么多是没有问题的啊 你按照说明书做应该没有问题 当然 你如果觉得很费的话 你可以加4UL 一样可以扩
3楼2010-06-12 16:36:58
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gdpn900

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
学习2楼了 呵呵
4楼2010-06-12 18:01:51
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