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dhmdddd

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】关于基因敲除已有5人参与

最近在做大肠基因敲除,转化的是PCR产物,是DNA片段,2000Kb多点,转化后,平板上有菌落长出来,接摇瓶转化子也长,同样的抗生素浓度下转化前的菌株不长,这可以说明转化子表现抗性吧?但是验证PCR时,P出来的条带总是在一条线上,也就是说没有重组上,感觉很奇怪,不知道各位有没有遇到这种情况,这到底是什么原因,转化进去片段应该不会表达的吧?不知道我有没有把问题说清楚,请高手指教!!先谢过了!!
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上班族,学习ing……
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davidck

金虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
dhmdddd(金币+2): 谢谢~ 2011-12-24 19:18:43
zhang8826857(金币+1): 鼓励交流 2011-12-24 22:27:15
引用回帖:
16楼: Originally posted by linxi8579 at 2010-10-22 17:14:22:
会不会是瞬时表达的抗性,你传几代看看。我们这边做真菌的基因敲出的,也是经常遇到这种情况,就是重做。祝你好运。

这位同学说的挺对的,
另外就是后面一个同学说的,利用DpnI ,把你PCR产物里的模板质粒去掉
这种情况,你不怕麻烦的话就多挑单菌落就ok了,然后菌落PCR验证下就木有问题了
20楼2011-12-23 11:19:03
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