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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】发酵液中氨基氮的测定
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卡婷

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】发酵液中氨基氮的测定已有12人参与

有没有简单一点的，凯氏定氮法太麻烦了，
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1楼2010-06-08 23:33:07
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reasonspare

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
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lstt09nk(金币+3):热心的斑斑~~ 2010-06-09 19:06:24
引用回帖:
Originally posted by 卡婷 at 2010-06-08 23:33:07:
有没有简单一点的，凯氏定氮法太麻烦了，

To 虫友：你说的问题很有问题：
测定氨基酸的含量的方法不下百种，关键看你要解决什么问题：要搞清你要做什么。
凯氏定氮法：测的全氮，而不是氨基酸。

另外，你是测定所有氨基酸的含量还是某种氨基酸的含量：α-氨基氮的测定（茚三酮法，见附表）

如果想知道所有的氨基酸的种类和含量：ＨＰＬＣ就完全可以。见附图，18种氨基酸一下子定性定量分析全有了。




α-氨基氮的测定（茚三酮法）

1、实验试剂

a显色剂

100克磷酸氢二钠（Na2HPO4.12H2O）

60克磷酸二氢钾（KH2PO4）

5.00克水合茚三酮

3.00克果糖

用水溶液溶解后稀释至1升（此溶液在低温下用棕色瓶可保存2周，pH应为6.6-6.8。操作时可以按比例配成100ml）。

b稀释溶液：2克碘酸钾溶于600ml水中，再加入96%乙醇400ml.

c标准溶液：溶107.2mg甘氨酸于100ml水中，0℃贮藏。用时按要求稀释。该溶液含有200mgα-氨基氮/升。

2、实验操作

取糖化的麦芽汁1.00ml（或者是其他的合适量，使稀释后的浓度为1-3mgα-氨基氮/升），放入100ml的容量瓶中，稀释到刻度，摇匀。

标准甘氨酸溶液稀释液：取1.00ml标准溶液，在100ml的容量瓶中稀释到刻度。

取麦芽汁稀释溶液、水、标准的甘氨酸溶液（三个）稀释液各2.00ml，放入比色管中，（水用于空白对照），各比色管中分别加入1.00ml的显色剂，摇匀，在沸水中加热16min。（此时应该准备20℃的水浴）

20℃水浴中冷却20min。

加入5.00ml的碘酸钾稀释溶液，摇匀，在30min内于570nm处测定吸光度值。

3、计算

游离的α-氨基氮（毫克/升麦芽汁）=2×100× 样品溶液吸光度值 / 标准溶液平均吸光度




[ Last edited by reasonspare on 2010-6-9 at 06:11 ]
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大慈大悲观世音救苦救难观世音有求必应观世音普渡众生观世音千手千眼观世音官大敢管观世音无处不在观世音普观普长观世音南无观世音菩萨
2楼2010-06-09 06:09:40
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85715623

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
直接用氨基酸自动分析一就好啊。省时又高效。
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3楼2010-06-09 08:25:15
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55530263a

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):很不错，感谢分享~~ 2010-06-09 19:09:07
公司SOP中抄出来的。
氨基氮化验方法

1  原理

氨基与中性甲醛反应，生成中强酸，可用氢氧化钠标准溶液滴定。

反应式：4NH4 ＋ + 6HCHO = (CH2)6N4H＋ + 6H2O + 3H＋

RCHNH2CH2 + HCHO+ = RCH(NCH2)COOH + H2O

OH- + H＋= H2O

2  试剂配制

2.1  18％中性甲醛溶液：量取分析纯甲醛溶液2000ml于2000ml试剂瓶中，加入2000ml纯化水，摇匀。临用前倒入1000ml的试剂瓶中，以酚酞为指示剂，用0.03569mol/l的NaOH溶液滴定至微红色。

2.2  甲基红指示剂：称取0.1g甲基红，用无水乙醇溶解并稀释至100ml。

2.3  酚酞指示剂：称取1.0g酚酞，用无水乙醇溶解并稀释至100ml。

2.4  盐酸(0.1mol/l)、氢氧化钠(0.03569mol/l)标准溶液：略。

3  测定

精密量取样品00ml至250ml锥形瓶中，加入20ml纯化水，甲基红指示剂3滴，用0.1mol/l盐酸滴定至红色，放置3min，用0.03569mol/l氢氧化钠溶液滴定至黄色。加入18%中性甲醛5 ml，摇匀放置3～5min。加入3滴酚酞指示剂，用0.03569mol/l氢氧化钠标准溶液滴定，到达滴定终点时溶液由黄色变为微红色，记录消耗的氢氧化钠标准溶液体积。

4   计算

    N(μg/ml)＝ M×VNaOH÷V样品×m×1000 ≈ 100VNaOH

    式中：  M   为氢氧化钠标准溶液浓度，mol/l；

            VNaOH  为滴定时消耗氢氧化钠标准溶液的体积，ml；

            V样品 为量取样品的体积，ml；            m   为氮原子摩尔质量，14。
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4楼2010-06-09 11:44:31
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卡婷

新虫 (初入文坛)
我是想测发酵液中残留的总氮，发酵液中有蛋白质，还有氨基酸，因为每隔几小时要取样，样品比较多，所以得选择个简单可行的检测方法
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5楼2010-06-09 13:36:24
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卡婷

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 55530263a at 2010-06-09 11:44:31:
公司SOP中抄出来的。
氨基氮化验方法

1  原理

氨基与中性甲醛反应，生成中强酸，可用氢氧化钠标准溶液滴定。

反应式：4NH4 ＋ + 6HCHO = (CH2)6N4H＋ + 6H2O + 3H＋

RCHNH2CH2 + HCHO+ = RCH(NCH2)C ...

这个样品是多少毫升？
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6楼2010-06-09 13:42:07
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008chf

金虫 (小有名气)
★
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那个好象是5ml。
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7楼2010-06-09 14:48:34
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乖小北

铁虫 (小有名气)
★
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2楼: Originally posted by reasonspare at 2010-06-09 06:09:40:
To 虫友：你说的问题很有问题：
测定氨基酸的含量的方法不下百种，关键看你要解决什么问题：要搞清你要做什么。
凯氏定氮法：测的全氮，而不是氨基酸。

另外，你是测定所有氨基酸的含量还是某种氨基酸的 ...

请茚三酮法测定游离氨基酸时，甘氨酸标准试样的光密度每次都要测吗？
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8楼2011-12-15 10:01:18
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ellenbole

木虫 (正式写手)
★
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同意4楼方法，即甲醛滴定法测定其中游离氨基酸，此法是发酵工业中测定发酵液中氨基氮含量变化常用的方法，简单易行，快速方便。
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9楼2012-01-14 13:28:13
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国青lihe

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by reasonspare at 2010-06-09 06:09:40:
To 虫友：你说的问题很有问题：
测定氨基酸的含量的方法不下百种，关键看你要解决什么问题：要搞清你要做什么。
凯氏定氮法：测的全氮，而不是氨基酸。

另外，你是测定所有氨基酸的含量还是某种氨基酸的 ...

说得对！
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10楼2012-01-14 13:47:31
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