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【求助/交流】发酵液中氨基氮的测定 已有12人参与
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| 有没有简单一点的，凯氏定氮法太麻烦了， |
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ellenbole
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9楼2012-01-14 13:28:13
reasonspare
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lstt09nk(金币+3):热心的斑斑~~ 2010-06-09 19:06:24
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To 虫友：你说的问题很有问题： 测定氨基酸的含量的方法不下百种，关键看你要解决什么问题：要搞清你要做什么。 凯氏定氮法：测的全氮，而不是氨基酸。 另外，你是测定所有氨基酸的含量还是某种氨基酸的含量：α-氨基氮的测定（茚三酮法，见附表） 如果想知道所有的氨基酸的种类和含量：ＨＰＬＣ就完全可以。见附图，18种氨基酸一下子定性定量分析全有了。 α-氨基氮的测定（茚三酮法） 1、实验试剂 a显色剂 100克磷酸氢二钠（Na2HPO4.12H2O） 60克磷酸二氢钾（KH2PO4） 5.00克水合茚三酮 3.00克果糖 用水溶液溶解后稀释至1升（此溶液在低温下用棕色瓶可保存2周，pH应为6.6-6.8。操作时可以按比例配成100ml）。 b稀释溶液：2克碘酸钾溶于600ml水中，再加入96%乙醇400ml. c标准溶液：溶107.2mg甘氨酸于100ml水中，0℃贮藏。用时按要求稀释。该溶液含有200mgα-氨基氮/升。 2、实验操作 取糖化的麦芽汁1.00ml（或者是其他的合适量，使稀释后的浓度为1-3mgα-氨基氮/升），放入100ml的容量瓶中，稀释到刻度，摇匀。 标准甘氨酸溶液稀释液：取1.00ml标准溶液，在100ml的容量瓶中稀释到刻度。 取麦芽汁稀释溶液、水、标准的甘氨酸溶液（三个）稀释液各2.00ml，放入比色管中，（水用于空白对照），各比色管中分别加入1.00ml的显色剂，摇匀，在沸水中加热16min。（此时应该准备20℃的水浴） 20℃水浴中冷却20min。 加入5.00ml的碘酸钾稀释溶液，摇匀，在30min内于570nm处测定吸光度值。 3、计算 游离的α-氨基氮（毫克/升麦芽汁）=2×100× 样品溶液吸光度值 / 标准溶液平均吸光度  [ Last edited by reasonspare on 2010-6-9 at 06:11 ] |
2楼2010-06-09 06:09:40
85715623
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3楼2010-06-09 08:25:15
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lstt09nk(金币+2):很不错，感谢分享~~ 2010-06-09 19:09:07
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公司SOP中抄出来的。 氨基氮化验方法 1 原理 氨基与中性甲醛反应，生成中强酸，可用氢氧化钠标准溶液滴定。 反应式：4NH4 ＋ + 6HCHO = (CH2)6N4H＋ + 6H2O + 3H＋ RCHNH2CH2 + HCHO+ = RCH(NCH2)COOH + H2O OH- + H＋= H2O 2 试剂配制 2.1 18％中性甲醛溶液：量取分析纯甲醛溶液2000ml于2000ml试剂瓶中，加入2000ml纯化水，摇匀。临用前倒入1000ml的试剂瓶中，以酚酞为指示剂，用0.03569mol/l的NaOH溶液滴定至微红色。 2.2 甲基红指示剂：称取0.1g甲基红，用无水乙醇溶解并稀释至100ml。 2.3 酚酞指示剂：称取1.0g酚酞，用无水乙醇溶解并稀释至100ml。 2.4 盐酸(0.1mol/l)、氢氧化钠(0.03569mol/l)标准溶液：略。 3 测定 精密量取样品00ml至250ml锥形瓶中，加入20ml纯化水，甲基红指示剂3滴，用0.1mol/l盐酸滴定至红色，放置3min，用0.03569mol/l氢氧化钠溶液滴定至黄色。加入18%中性甲醛5 ml，摇匀放置3～5min。加入3滴酚酞指示剂，用0.03569mol/l氢氧化钠标准溶液滴定，到达滴定终点时溶液由黄色变为微红色，记录消耗的氢氧化钠标准溶液体积。 4 计算 N(μg/ml)＝ M×VNaOH÷V样品×m×1000 ≈ 100VNaOH 式中： M 为氢氧化钠标准溶液浓度，mol/l； VNaOH 为滴定时消耗氢氧化钠标准溶液的体积，ml； V样品 为量取样品的体积，ml； m 为氮原子摩尔质量，14。 |
4楼2010-06-09 11:44:31
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