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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 【求助】液相柱堵了怎么办
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pkming

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助】液相柱堵了怎么办已有14人参与

柱子：X-Bridge C18(4.6*150,3.5)
流动相：A: 0.1M NaAc水溶液+乙腈（93+7），用乙酸调pH=6.5; B：乙腈+水（80+20）。梯度洗脱       
样品：氨基酸和异硫氰酸苯酯（PITC）衍生化得到。
做2次就被堵了，保留时间前移1min左右，柱压在1ml/min水流动相时已经超过最大值4000。经检查确实是柱子堵了。分析可能是盐沉积或者样品吸附在色谱柱上，就用超纯水/甲醇（95/5）冲洗1d，后用水-甲醇-四氢呋喃-甲醇-水冲洗一天，后用水以0.05ml/min反冲洗40min，柱压有所下降，但是还是比高（水/甲醇95/5以0.5ml/min冲洗柱压还有3000之高）

着是无奈，请各位虫虫伸出援助之手，指点一二。必感激涕零
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1楼2010-05-28 08:22:29
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luomuwuhen

金虫 (著名写手)
pkming(金币+5): 2010-05-28 10:09:22
楼主可以反冲柱子，先用水，然后水-甲醇-四氢呋喃-甲醇-水小流速过夜，或者水-乙腈-异丙醇-乙腈。楼主可以看一下柱子的说明书，上边都会有怎么处理类似盐析出的解决方法
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药物合成
2楼2010-05-28 08:33:42
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zhongweixu

铁杆木虫 (著名写手)
pkming(金币+2): 2010-05-28 10:11:39
这种情况看样子只能反冲了
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3楼2010-05-28 09:12:01
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yjj1314

金虫 (小有名气)
pkming(金币+3): 2010-05-28 10:12:04
10%甲醇水反冲柱子试试，流速0.5ml/min。我的柱子就是这么冲好的
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4楼2010-05-28 09:13:07
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pkming

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by luomuwuhen at 2010-05-28 08:33:42:
楼主可以反冲柱子，先用水，然后水-甲醇-四氢呋喃-甲醇-水小流速过夜，或者水-乙腈-异丙醇-乙腈。楼主可以看一下柱子的说明书，上边都会有怎么处理类似盐析出的解决方法

反冲流速和时间怎么把握，如果时间久了会不会影响柱子。我找了说明书，没有讲盐析后怎样办，只是说极性物质污染用你说的溶剂正向冲洗
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5楼2010-05-28 10:11:18
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pkming

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by yjj1314 at 2010-05-28 09:13:07:
10%甲醇水反冲柱子试试，流速0.5ml/min。我的柱子就是这么冲好的

这个流速是否太大，你用的是什么柱子？反冲时间是多久？谢谢
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6楼2010-05-28 10:12:47
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yangxinlei

★
pkming(金币+1):谢谢参与
pkming(金币+5): 2010-05-28 10:21:28
你做的PITC氨基酸衍生实验，这个条件一定要把PITC除干净，否则进样，2针肯定堵柱子。而且是永久性损害柱子，估计你的柱子是恢复不过来了。现在做氨基酸分析已经不流行PITC了，用AccQ Tag方法或OPQ&FMOC的方法比较好。建议使用这两个方法。
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7楼2010-05-28 10:19:22
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pkming

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by yangxinlei at 2010-05-28 10:19:22:
你做的PITC氨基酸衍生实验，这个条件一定要把PITC除干净，否则进样，2针肯定堵柱子。而且是永久性损害柱子，估计你的柱子是恢复不过来了。现在做氨基酸分析已经不流行PITC了，用AccQ Tag方法或OPQ&FMOC的方法 ...

谢谢，确实存在这方面的问题，所以我每次都用正己烷萃取3次。这个方法我看文献中用的挺多的，所以也就选了。
真的没有办法恢复柱子了么？
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8楼2010-05-28 10:22:50
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xu_713

金虫 (正式写手)
★
pkming(金币+1):谢谢参与
pkming(金币+1): 2010-05-28 10:48:46
楼主   直接再买吧    下次要注意了    我去我们公司做氨基酸的检测  他们都很不情愿的！！怕堵
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(⊙o⊙)…口水是淹不死我滴！
9楼2010-05-28 10:26:41
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yangxinlei

pkming(金币+2): 2010-05-28 10:48:53
如果按你说的那样反冲了还是堵的话估计是恢复不过来了，如果你还有同样一根用过的旧柱子，可以打开柱头，更换一点填料，再看看。
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10楼2010-05-28 10:27:47
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