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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药代动力学 » 液相色谱柱堵了，怎么办
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20060992

铜虫 (小有名气)

[求助] 液相色谱柱堵了，怎么办

我现在将药物溶解在0.5ml血浆条件下，将血浆经过1ml乙腈沉淀蛋白，离心后过C18小柱，收集洗脱液N2吹干，加溶解试剂后过0.22um滤器进样分析，怎么多程序怎么还能将柱子给堵了呢？
堵后我用100%甲醇冲了，柱压无降，我后又用100%异丙醇冲，柱压还是不降，我也将柱子反冲过。
而且柱压现在比刚开始发现堵了得时候还要高。
难道没有解决的办法了吗？
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1楼 2011-10-24 12:10:25
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TLC菜鸟

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

20060992(金币+3): 2011-10-25 19:01:42
生物样品堵的话一般是盐类太多了，你用50%甲醇50%水冲洗看看，不行的话提高水的含量
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只为活个问心无愧。。
2楼2011-10-24 12:33:41
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lkj2596

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

20060992(金币+3): 2011-10-25 19:01:50
可以加大水的比例，尽量不要反冲。
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多学多看
3楼2011-10-24 14:41:29
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gry660302

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

20060992(金币+3): 2011-10-25 19:01:55
你先用10%甲醇冲洗柱子，再用100%甲醇洗，加装预柱。
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失败是成功之母
4楼2011-10-24 14:58:28
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hemin066

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

20060992(金币+3): 2011-10-25 19:01:59
做药动一定要加装预柱。如果用了缓冲盐可以先用高比例的水去冲冲柱子，不行再反冲！
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5楼2011-10-24 15:08:45
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
jiangchunyong(金币+1): 谢谢 2011-10-24 15:36:37
20060992(金币+3): 2011-10-25 19:02:03
血浆这类东西，最容易堵色谱柱的了。
既然用异丙醇都不行了，那么试试用100%的二氯甲烷（或者100%己烷），使用前注意要用异丙醇过渡，使用后也需要用异丙醇过渡。不然这些溶液会与水乙腈等溶液形成小液滴破坏色谱柱。
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守候在风中的宁静。
6楼2011-10-24 15:19:41
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wangxiang88

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

20060992(金币+3): 2011-10-25 19:02:07
10%甲醇冲洗，比例高的水冲冲
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7楼2011-10-24 16:40:57
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杨晓波

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

20060992(金币+3): 2011-10-25 19:02:10
极性大的话就用5%的水相冲，流速放到0。2~0。3ML/MIN。极性小的话就用四氢呋喃色谱极的，实在不行就反冲下，死马当活马医吧。
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愿意和大家共同交流经验,共同学习!
8楼2011-10-24 20:51:36
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zyw2525

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

20060992(金币+3): 2011-10-25 19:02:14
用55度热水冲洗看看，再分四次注射DMSO，每次100ul。冲洗时间要长。
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9楼2011-10-25 12:58:00
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小狼851226

木虫 (正式写手)
生物产品不晓得，我们再做一个粘度比较大的产品的时候，色谱柱子就老是堵。所以我们就用前处理样品来解决。
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10楼2011-10-26 09:04:19
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