24小时热门版块排行榜    

查看: 1751  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

snowice

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】有关分子克隆发生突变的疑惑 已有6人参与

我在做克隆时挑了几个建好的阳性单克隆送去测序,结果每种的目的片段都有4-6个位点发生突变,而且每种突变的位点还不一样,想问一下是pcr的时候就产生了一系列有不同突变位点的目的片段还是在下面的几步中发生了突变,最可能是那种情况呢,我的目的片段1000多点,用的promega的taq。真后悔没用KOD plus。。。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

爱吃爱睡懒得要死的猪头
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snowice

银虫 (小有名气)

模板是老板300美刀买一小日本的,不知道有没有测序,应该没有什么问题。如果排除模板的问题,单纯pcr也会出现这种产生有不同突变位点的目的片段吗,因为还有许多阳性克隆没去测序,不知道还要不要送测了。
那就用pfu重新p吧,话说1100的长度,pfu延伸2分钟够了吧。
引用回帖:
Originally posted by gastrodia at 2010-05-21 22:48:20:
你的模板是否有问题,一般pfu在35个循环之内基本都不会发生突变

爱吃爱睡懒得要死的猪头
5楼2010-05-21 23:08:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
循环数几个?普通的Taq对于1000多的片段,最好就是不要超过30个循环,2x个比较合适
2楼2010-05-21 22:17:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snowice

银虫 (小有名气)

30个循环,就是感觉突变率太高了,那基本上就是在pcr的时候产生的突变了吗,主要是突变位点还不一样,不知道是不是在细菌中突变了?
另外 用pfu在1000多点很少出现突变吧,kod 用着感觉太烧钱
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-05-21 22:17:37:
循环数几个?普通的Taq对于1000多的片段,最好就是不要超过30个循环,2x个比较合适

爱吃爱睡懒得要死的猪头
3楼2010-05-21 22:34:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gastrodia

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你的模板是否有问题,一般pfu在35个循环之内基本都不会发生突变
4楼2010-05-21 22:48:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料专硕英一数二306 +5 z1z2z3879 2026-03-18 5/250 2026-03-19 07:43 by BruceLiu320
[考研] 0703化学 305求调剂 +4 FY_yy 2026-03-14 4/200 2026-03-19 05:54 by anny19840123
[考研] 328求调剂,英语六级551,有科研经历 +3 生物工程调剂 2026-03-17 7/350 2026-03-18 20:41 by Wangjingyue
[考研] 一志愿武理材料305分求调剂 +5 想上岸的鲤鱼 2026-03-18 6/300 2026-03-18 17:53 by 无际的草原
[考研] 0703化学调剂 ,六级已过,有科研经历 +10 曦熙兮 2026-03-15 10/500 2026-03-18 14:19 by 007_lilei
[考研] 0703化学调剂 +4 pupcoco 2026-03-17 7/350 2026-03-18 12:14 by djl2006
[考研] 0703化学336分求调剂 +6 zbzihdhd 2026-03-15 7/350 2026-03-18 09:53 by zhukairuo
[考研] 有没有道铁/土木的想调剂南林,给自己招师弟中~ +3 TqlXswl 2026-03-16 7/350 2026-03-17 15:23 by TqlXswl
[考研] 梁成伟老师课题组欢迎你的加入 +8 一鸭鸭哟 2026-03-14 10/500 2026-03-17 15:07 by 一鸭鸭哟
[考研] 一志愿苏州大学材料工程(085601)专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +6 大火山小火山 2026-03-16 8/400 2026-03-17 15:05 by 无懈可击111
[考研] 290求调剂 +6 孔志浩 2026-03-12 11/550 2026-03-17 14:41 by 周舟舟77
[考研] 材料与化工专硕调剂 +5 heming3743 2026-03-16 5/250 2026-03-17 14:03 by 勇敢太监王公公
[考研] 一志愿南京大学,080500材料科学与工程,调剂 +4 Jy? 2026-03-16 4/200 2026-03-17 11:02 by gaoqiong
[考研] 0856专硕279求调剂 +5 加油加油!? 2026-03-15 5/250 2026-03-15 11:58 by 2020015
[考研] 085601材料工程315分求调剂 +3 yang_0104 2026-03-15 3/150 2026-03-15 10:58 by peike
[考研] 330求调剂 +3 ?酱给调剂跪了 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:13 by JourneyLucky
[考研] 材料专硕350 求调剂 +4 王金科 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:02 by ruiyingmiao
[考研] 290求调剂 +7 ADT 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:17 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 程雨杭 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:06 by JourneyLucky
[考博] 福州大学杨黄浩课题组招收2026年专业学位博士研究生,2026.03.20截止 +3 Xiangyu_ou 2026-03-12 3/150 2026-03-13 09:36 by duanwu655
信息提示
请填处理意见