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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】real-time 的两个问题。
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gdongli8325

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】real-time 的两个问题。已有4人参与

今天做real-time，有三个时间点，结果第一个时间点的三个重复不好，所以想问一下我可以只重复这个时间点吗？我觉得行不通，但是还想听听大家的意见。
此外，对照基因和样品所用的模板量必须是一样的吗？比如说都用2ul，能不能对照基因用2ul，样品用4ul（样品需要更多的模板才能得到合适的Ct值），主要是想节省点模板。
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1楼2010-05-20 05:20:59
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ljsh

铁杆木虫 (著名写手)
gdongli8325(金币+1): 2010-05-20 14:59:53
对照基因和样品所用的模板量必须一样, 才具有参照意义；
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2楼2010-05-20 05:32:56
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刘仕博

金虫 (著名写手)
★
lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~ 2010-05-20 21:42:42
只重复一个时间点应该是不行的吧，这样的数据和其他的两个时间点应该没有可比性。
对照基因一定要和样品一样，要不怎么对照啊~
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生命在于折腾~
3楼2010-05-20 16:26:56
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wywangying169

银虫 (小有名气)
对照基因和模板比须严格一样，在加样的时候格外要注意， 这样才比较出它的表达量的高低！
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好好自学，好好工作
4楼2010-05-21 16:02:43
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
gdongli8325(金币+2): 2010-05-21 21:55:06
引用回帖:
Originally posted by ljsh at 2010-05-20 05:32:56:
对照基因和样品所用的模板量必须一样, 才具有参照意义；

如果我按照一定比例稀释了模板，在最后统计的时候再换算回来是否可以？
因为实际遇到的情况是，内参的拷贝数和目的基因相差很悬殊，如果不将内参稀释一下，只要PCR一开始，就进入指数扩增阶段，而目的基因在40个循环才进入指数扩增阶段
但是，我也考虑到也许这样做就会使扩增效率不一致了，不知道该怎么解决
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5楼2010-05-21 16:30:29
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ljsh

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
出现这种情况，可考虑换用其他参照基因。
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6楼2010-05-21 22:22:24
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