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gdongli8325

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】real-time 的两个问题。 已有4人参与

今天做real-time,有三个时间点,结果第一个时间点的三个重复不好,所以想问一下我可以只重复这个时间点吗?我觉得行不通,但是还想听听大家的意见。
此外,对照基因和样品所用的模板量必须是一样的吗?比如说都用2ul,能不能对照基因用2ul,样品用4ul(样品需要更多的模板才能得到合适的Ct值),主要是想节省点模板。
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ljsh

铁杆木虫 (著名写手)

gdongli8325(金币+1): 2010-05-20 14:59:53
对照基因和样品所用的模板量必须一样, 才具有参照意义;
2楼2010-05-20 05:32:56
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刘仕博

金虫 (著名写手)


lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~ 2010-05-20 21:42:42
只重复一个时间点应该是不行的吧,这样的数据和其他的两个时间点应该没有可比性。
对照基因一定要和样品一样,要不怎么对照啊~
生命在于折腾~
3楼2010-05-20 16:26:56
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wywangying169

银虫 (小有名气)

对照基因和模板比须严格一样,在加样的时候格外要注意, 这样才比较出它的表达量的高低!
好好自学,好好工作
4楼2010-05-21 16:02:43
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

gdongli8325(金币+2): 2010-05-21 21:55:06
引用回帖:
Originally posted by ljsh at 2010-05-20 05:32:56:
对照基因和样品所用的模板量必须一样, 才具有参照意义;

如果我按照一定比例稀释了模板,在最后统计的时候再换算回来是否可以?
因为实际遇到的情况是,内参的拷贝数和目的基因相差很悬殊,如果不将内参稀释一下,只要PCR一开始,就进入指数扩增阶段,而目的基因在40个循环才进入指数扩增阶段
但是,我也考虑到也许这样做就会使扩增效率不一致了,不知道该怎么解决
5楼2010-05-21 16:30:29
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ljsh

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
出现这种情况,可考虑换用其他参照基因。
6楼2010-05-21 22:22:24
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