24小时热门版块排行榜

返回列表

zj0726

铜虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 153.1
帖子: 71
在线: 9.2小时
虫号: 456975
注册: 2007-11-12
专业: 神经生物学

[交流] 【求助/交流】RT-PCR 已有4人参与

大家做RT-PCR时，RNA加多少？CDNA加多少呀？最近做RT-PCR，结果老是不很理想，P出来的条带不亮，不知道是哪出了问题，请高手们指点一下

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

急求RT-PCR电泳图分析已经有22人回复
关于RT-PCR的众多细节已经有18人回复
实时荧光RT-PCR实验的相关问题已经有8人回复
求助！关于RT-PCR的问题！已经有20人回复
请教RTPCR。。已经有4人回复
RT-PCR相关问题已经有5人回复
ＲＴ－ＰＣＲ问题求助已经有18人回复
【求助/交流】做过RT-PCR的请进已经有12人回复
【求助/交流】RT-PCR不成功已经有25人回复
RT-PCR后的cDNA呢？已经有17人回复

1楼 2010-05-19 17:31:47

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

zhwenxing

木虫 (著名写手)

尛森蟲

应助: 11 (小学生)
贵宾: 0.005
金币: 2189.8
散金: 50
红花: 2
帖子: 1324
在线: 93.3小时
虫号: 596551
注册: 2008-09-09
专业: 疫苗学

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2):很热心很细致 2010-05-19 18:44:18

烦请楼主将问题说得清楚一些，具体的实验步骤如何做的，大家才能各抒己见哈。O(∩_∩)O哈哈~

1、您是一步法还是两步法？一步法的话，考虑RNA的纯度问题，还有反应体系的精确性。两步法的话，先反转录，根据不同的逆转录酶的要求去考量RNA的用量。

2、如果您用的是总RNA的话，比如promega的m-mlv，那么，25ul的反应体系，需要加入量为2-3ug，酶的用量为200U，如果用AMV的话，需要25U就足够了，但是其内切酶活性等均会升高。自己根据酶的性质来确定。

3、如果用mRNA作为反转录的模板会好很多，不知您是否需要纯化mRNA。

4、扩增如Actin之类的基因检测反转录的结果并不能准确的定量反转录的效率。

……