| 查看: 1613 | 回复: 9 | |||
[交流]
【求助/交流】以连接产物做模板扩增此连接产物，有问题请教各位达人~麻烦您帮忙分析下已有6人参与
|
|
各位虫友： 你们好！我这一阶段的实验是先pcr扩增出三条不同的DNA片段（都加了酶切位点），回收，酶切后再回收，用T4DNA连接酶16度连接16个小时，然后以此三段连接产物为模板，用第一个片段的正向引物和第三个片段的反向引物作为引物，扩增这个连接产物。但总得不到理想的结果，非特异性条带较多，目的条带不亮，而且有时没有。请各位帮帮忙分析下！不胜感激！！！ 引物合成报告单上这两个引物的退火温度都是59.1度；G+C含量都是66.7%。连接产物的长度约2200bp。20μl的体系：模板6μl；引物分别2μl；Taq Master Mix 10μl。条件：93度2min；93度30s，58度45s，72度5min，32个循环；72度8min。 谢谢啦！ |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有199人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
统计达人请进，金币求助两道数据处理的题
已经有10人回复- 有关2012csc申请的几个问题，请达人踊跃回答
已经有21人回复
- 请教有经验的有机达人——过柱分离问题
已经有10人回复
- 这是一家外文期刊对文章长度的要求，但看不懂，恳求达人出场！
已经有3人回复
- 求助环保达人，固体废弃物重金属浸出到底用什么方法？
已经有8人回复
- 请达人交流：国基会评时会评专家主要参考哪些材料进行评审表决？
已经有6人回复
- 请问申请北美留学paper的价值问题，求达人帮忙
已经有7人回复
- 中国水利水电科学研究院待遇怎样，请达人告知
已经有21人回复
- 【求助/交流】关于扩增未知序列，生物达人请进~
已经有10人回复
- 【求助/交流】做DGGE，直接用带夹引物扩增不出来，怎么办？
已经有10人回复
- 【求助】向各位前辈达人请教户口问题
已经有10人回复
- 【求助】达人推荐传质方面的经典书籍
已经有4人回复
2楼2010-05-09 17:26:18
3楼2010-05-09 18:50:00
liudeng821111
木虫 (正式写手)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 43.4
- 散金: 58
- 红花: 8
- 帖子: 496
- 在线: 164.8小时
- 虫号: 478978
- 注册: 2007-12-14
- 性别: GG
- 专业: 图书馆、情报与文献学
4楼2010-05-09 21:12:33
5楼2010-05-09 21:44:19
yujiaping1
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1365.2
- 散金: 10
- 红花: 5
- 帖子: 1174
- 在线: 66.6小时
- 虫号: 929883
- 注册: 2009-12-17
- 性别: MM
- 专业: 疫苗学
6楼2010-05-09 21:48:38
7楼2010-05-09 21:57:21
临风7071
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 2167.6
- 散金: 79
- 红花: 7
- 帖子: 617
- 在线: 553.9小时
- 虫号: 555997
- 注册: 2008-05-10
- 性别: GG
- 专业: 植物生殖生物学
8楼2010-05-09 21:58:06
9楼2010-05-09 22:04:48
10楼2010-05-09 22:12:02