24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1515  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

plantst5928

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于小片段连接的问题 已有7人参与

本人最近要把一个基因分成几个小片段分别连接到载体上去,大约每个片段是60bp。那我应该怎么做?直接合成双链DNA,两边加酶切位点。还是设计引物扩增目的片段,我的片段只有60bp,引物一般都30bp,我怎么延伸啊。我如果直接把引物设计成目的片段,扩PCR的时候只退火不延伸,是不是也能得到目的片段啊。
小弟现在还没开始,心里一直在想哪个方案可行,请做过的高手飘过留下建议。
谢谢!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
直接合双链,59个碱基就好,然后退火,退火完之后刚好就有黏性末端,直接就和酶切的载体连
60个生工就算另外一个档次的价格啦
当然你要更长也没办法
5楼2010-05-08 13:33:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
plantaqp(金币+1):欢迎多来交流 2010-05-08 04:04:34
只退火不延伸,是不是也能得到目的片段 。。。。。怎么可能啊,直接拿引物做连接不就行了吗,或者说直接酶切引物然后链接到你的载体上 。。。。
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
2楼2010-05-08 00:37:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

plantaqp

金虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢交流~~ 2010-05-08 12:27:36
楼上说的不对,引物是单链的怎么酶切?

分别合成两条链(带没切接头的),拿到引物后,退火,连接就可以了。
3楼2010-05-08 04:19:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
楼上说的对,那就直接那引物退火就行了,呵呵。还是直接合成双链吧
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
4楼2010-05-08 11:49:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 申博 +3 Xyyx. 2026-04-18 3/150 2026-04-20 10:44 by YuY66
[考研] 26药学专硕105500求调剂 +7 喽哈加油 2026-04-13 8/400 2026-04-19 20:21 by Equinoxhua
[考研] 294求调剂 +8 淡然654321 2026-04-17 9/450 2026-04-19 19:51 by Equinoxhua
[考研] 求调剂推荐 +9 小聂爱学习 2026-04-14 9/450 2026-04-19 17:03 by 中豫男
[考研] 085404 22408 309分求调剂 +10 lzmk 2026-04-14 11/550 2026-04-19 16:42 by 中豫男
[论文投稿] 有没有接收比较快的sci期刊呀,最好在一个月之内的,研三孩子求毕业 20+4 之护着 2026-04-16 6/300 2026-04-19 13:00 by Aaron_zyn
[考研] 327求调剂 +27 Xxjc1107. 2026-04-13 30/1500 2026-04-19 08:22 by cuisz
[考研] 0854求调剂 +23 门路摸摸 2026-04-15 27/1350 2026-04-19 01:59 by 烟雨流涯
[考研] 300求调剂 +12 橙a777 2026-04-15 12/600 2026-04-18 23:51 by 路病情
[考研] 接受任何调剂 +6 也就是栗子 2026-04-17 7/350 2026-04-18 17:20 by 涵竹刘
[考研] 297,工科调剂? +5 河南农业大学-能 2026-04-14 5/250 2026-04-18 15:17 by Equinoxhua
[考研] 22408 312求调剂 +24 门路摸摸 2026-04-14 26/1300 2026-04-18 13:04 by wunaiy88
[考研] 急需调剂 +9 绝不放弃22 2026-04-15 10/500 2026-04-18 08:09 by chixmc
[考研] 一志愿中科大材料与化工,353分还有调剂学校吗 +10 否极泰来2026 2026-04-15 12/600 2026-04-17 17:54 by mapenggao
[考研] 295分求调剂 +5 ?要上岸? 2026-04-17 5/250 2026-04-17 16:51 by fenglj492
[考研] 297,工科调剂?河南农业大学本科 +14 河南农业大学-能 2026-04-14 14/700 2026-04-16 14:41 by dingyanbo1
[考研] 药学求调剂 +14 喽哈加油 2026-04-14 16/800 2026-04-16 10:15 by beilsong20
[考研] 一志愿A区211,22408 321求调剂 +6 随心所欲☆ 2026-04-15 7/350 2026-04-15 21:45 by lbsjt
[考研] 297工科调剂? +14 河南农业大学-能 2026-04-13 15/750 2026-04-15 13:25 by 黑科技矿业
[考研] 考研调剂 +13 长弓傲 2026-04-13 14/700 2026-04-14 14:44 by zs92450
信息提示
请填处理意见