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biochem301

银虫 (小有名气)

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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2):欢迎交流! 2010-05-06 17:25:38
纯化的程序一般是这样的,相信你也是看了资料的,不过PEG浓缩后会产生沉淀,有蛋白重溶的问题,不过不影响结果。蛋白纯化理论都很简单,但是要想纯化好还是需要摸索的
2楼2010-05-06 17:17:07
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liyong1981

金虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
恩,是的。纯化出来有没有活性又是另说,所以啊,这是很复杂的。做好不容易啊~
3楼2010-05-07 09:24:24
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月月大可

木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+3):感谢回帖交流~~ 2010-05-07 11:25:30
如果是初次试探不建议30mM咪唑后直接就升到300mM,而是做个梯度升高,看看目的蛋白挂柱能力强弱。如果结合的非常牢,可以提到Washing Buffer的咪唑的浓度。
NaCl我平常只是用500mM的,没有用过这么高的。
如果你的蛋白含有半胱氨酸,记得加 β—ME或者TCEP。

就像二楼说的,纯化方案基本都是这样,但是具体的细节要根据你蛋白的性质而确定了,会有不少差别。
4楼2010-05-07 09:32:39
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jasco

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):欢迎多多交流~~ 2010-05-07 11:25:56
同意楼上的,还补充几点:
1.是原核表达的么?如果是的话,需要考虑包涵体表达,
2.目的蛋白的pI值是多少?按照这个确定buffer的pH
3.透析注意梯度,防止蛋白析出
4.浓缩可以用超滤管
5楼2010-05-07 09:51:22
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月月大可

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
补充的非常到位。
6楼2010-05-07 10:37:57
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