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1楼2010-05-06 15:54:50
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biochem301

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
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amisking(金币+2):欢迎交流！ 2010-05-06 17:25:38
纯化的程序一般是这样的，相信你也是看了资料的，不过PEG浓缩后会产生沉淀，有蛋白重溶的问题，不过不影响结果。蛋白纯化理论都很简单，但是要想纯化好还是需要摸索的
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2楼2010-05-06 17:17:07
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liyong1981

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
恩，是的。纯化出来有没有活性又是另说，所以啊，这是很复杂的。做好不容易啊～
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3楼2010-05-07 09:24:24
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月月大可

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
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lstt09nk(金币+3):感谢回帖交流~~ 2010-05-07 11:25:30
如果是初次试探不建议30mM咪唑后直接就升到300mM，而是做个梯度升高，看看目的蛋白挂柱能力强弱。如果结合的非常牢，可以提到Washing Buffer的咪唑的浓度。
NaCl我平常只是用500mM的，没有用过这么高的。
如果你的蛋白含有半胱氨酸，记得加 β—ME或者TCEP。

就像二楼说的，纯化方案基本都是这样，但是具体的细节要根据你蛋白的性质而确定了，会有不少差别。
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4楼2010-05-07 09:32:39
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jasco

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
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lstt09nk(金币+2):欢迎多多交流~~ 2010-05-07 11:25:56
同意楼上的，还补充几点：
1.是原核表达的么？如果是的话，需要考虑包涵体表达，
2.目的蛋白的pI值是多少？按照这个确定buffer的pH
3.透析注意梯度，防止蛋白析出
4.浓缩可以用超滤管
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5楼2010-05-07 09:51:22
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月月大可

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
补充的非常到位。
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6楼2010-05-07 10:37:57
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