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yangbing1882

铁杆木虫 (小有名气)

[交流] 求助！！！关于药典

求2010版药典附录中关于香草醛（香兰素）
学名3，甲氧基4，羟基苯甲醛 的介绍
溶解啊 测定什么的 我要用香草醛-浓酸法测定原花青素
= =
该怎么配了 要测吸光度的  纠结中
我要疯掉了

[ Last edited by yangbing1882 on 2010-5-4 at 12:16 ]
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走过路过别错过。。。。
1楼 2010-05-04 12:05:20
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niuxiaohui

木虫 (小有名气)
咱们论坛已经有2010新药典了，自己下来看看呀
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2楼2010-05-04 12:24:29
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bear2007

铁杆木虫 (著名写手)
yangbing1882(金币+10, 博学EPI+1): 2010-05-04 19:02:15
可以参照这种方法：https://www.tcmtcm.com/OPC/3.htm

蚕豆皮中原花青素提取的工艺研究
     1．2 试药、试剂 蚕豆皮(粉碎至粒度为4O目，放人广口瓶备用)；儿茶素对照品(中国药品生物制品检定所，批号 110878—200102)。甲醇、乙醇、丙酮、硫酸、香草醛，均为分析纯。

2 实验方法

2．1 蚕豆皮中原花青素的提取方法准确称取粉碎后的蚕豆皮5．0 g于150 mL圆底烧瓶中，在一定料液比、溶剂浓度、微波功率条件下提取一定时间，取出过滤，将滤液减压浓缩，测定原花青素的含量。本文中以百分含量表示，即每100 g蚕豆皮经提取得到的原花青素的量。

2．2 原花青素含量的测定 原花青素由不同数量的儿茶素或表儿茶素结合而成，最简单的原花青素是儿茶素与表儿茶素形成的二聚体，此外还有三聚体、四聚体、直至十聚体等等。国际通用的原花青素的分析方法是分光光度法，本文选用香草醛检测法。 原花青素的显色机理与儿茶素相似，在酸性条件下，原花青素组成单元儿茶素的A环化学活性较高，其上的羟基可以和香草醛发生缩合反应，在浓酸作用下形成的产物变为有色的正离子，由于香草醛和多酚类物质的一对一的特异结合，根据此正碳离子吸光度可测定出原花青素含量。此法具有操作简单、重现性好、线性范围宽的优点，目前普遍用于测定原花青素的含量。

2．2．1 标准曲线的绘制

1)溶液配制

儿茶素标准液：准确称取儿茶素标准品(65℃真空干燥至恒重)，用50％ 甲醇制成浓度分别为0．04、0．08、0．12、 0．16、0．20 mg／mL的溶液作为标准溶液；30 g／L香草醛溶液：30 g香草醛溶于1000 mL甲醇中；30％ 硫酸溶液：30 mL 硫酸(95％ ～98％)+70 mL甲醇混合均匀。

2)标准曲线

分别准确移取不同浓度的儿茶素标准溶液各0．5 mL 于10 mL具塞比色管中，加入2．5 mL 30 s／L香草醛溶液，然后加入2．0 mL 30％硫酸溶液，30％条件下避光反应20 rain，以试剂溶液为空白，在500 nm处测定吸光度值，取标准液的浓度和吸光度数据经回归处理，回归方程Y=45．22x+ 0．001，r=0．9995。结果表明，儿茶素浓度在0．OO4～ O．02mg／mL范围内具良好的线性关系。

2．2．2 原花青素含量测定l j 将浓缩液加50％ 甲醇定容至25mL量瓶中，取上述溶液l mL，用50％ 甲醇定容至25 mL作为样品溶液；准确量取0．5 mL样品溶液，按照上述标准曲线方法进行测定，加入2．5 mL 30 g／L香草醛溶液，然后加入2．5 mL 30％硫酸溶液，30％条件下避光反应20 min，以样品溶液为空白，即0．5 mL样品溶液+2．5 mL甲醇+2．0mL 30％ 硫酸溶液，在500 nm 处测定吸光度值。

2．2．3 方法学考察

1)精密度实验 精密吸取样品溶液0．5 mL，于25 mL 量瓶中，重复测定5次，得RSD为0．92％ 。2)稳定性试验精密吸取同一样品溶液0．5 mL于25 mL量瓶中，照“2．2．2” 项下操作，分别于显色后l、2、3、4、5h在500 nm处测定吸光度，结果RSD为1．27％ ，表明供试品溶液中原花青素在测定的5 h内可保持稳定。

2．2．4 加样回收率试验精密称取已知含量的样品5份，分别加入一定量的儿茶素标准溶液适量，按样品原花青素 的提取方法提取后，照“2．2．2”项下操作，在500 nm处测定吸光度并计算回收率，结果平均回收率为96．86％ ，RSD为 1．82％ 。

2．2．5 工艺优化方法采用单因素试验法，对提取溶剂、提取溶剂浓度、浸泡时间、料液比、微波功率等进行初步考察，根据单因素试验结果确定正交试验的因素水平，优选蚕豆皮中原花青素的最佳微波提取工艺。

3 结果与分析

3．1 单因素试验

3．1．1 提取溶剂的影响

在相同的微波提取条件下，选用相同浓度的乙醇、甲醇、丙酮和蒸馏水进行提取，确定最佳提取溶剂，结果见图1。由图1显示，采用蒸馏水提取的效果较差，乙醇的提取效果优于甲醇、丙酮。甲醇、丙酮均有一定毒性，不适宜应用于食品工业生产。因此，本实验选择乙醇作为最佳的提取溶剂。

3．1．2 溶剂浓度的影响

准确称取蚕豆皮5．0 g 5份，分别用30％ 、40％ 、50％ 、 60％ 、70％ 乙醇50mL浸泡1h，微波功率400W 辐射10rain，考察溶剂浓度对提取结果的影响。

由图2可见，乙醇浓度达到50％ 时，原花青素的提取量最高，再升高乙醇浓度原花青素提取量已略有下降的趋势，原因是随着乙醇浓度的增大，使一些脂溶性物质的溶出增加。因此确定乙醇浓度50％ 时为提取效果最佳点。

3．1．3 浸泡时间的影响

精密称取蚕豆皮5．0 g 5份于150 mL圆底烧瓶中，各加入50％ 的乙醇溶液50 mL，分别浸泡0．5、1、2、3、4h后微波功率400W 辐射10min，考察浸泡时间对提取结果的影响.

由图3可知，在2 h以前，原花青素提取率随着浸泡时间的增长而增大，2 h后随时间的增长而略有减少。由于原花青素单元中含有多个羟基，在长时间浸泡过程中可能会弓l起其结构的变化，如氧化等。所以考虑到实验结果和实际成本，本文选择浸泡时间2 h。

3．1．4 料液比的影响

准确称取蚕豆皮5．0g 5份，分别加入50％ 乙醇25、50、 75、100、125mL浸泡2h，微波功率400W 辐射10min，考察料液比对提取结果的影响。

由图4可知，当料液比达到1：10后，再增大料液比，提取率趋于稳定，即_定比例的溶剂已将有效成份基本溶出完全，且过大的料液比会造成溶剂和能源的浪费，并给后面的浓缩带来困难。所以用50％ 乙醇溶液浸泡时的最佳料液比为1：10。

3．1．5 微波功率的影响

准确称取蚕豆皮5．0g 5份，加入50mL 50％乙醇室温的条件下浸泡2h，于100、200、400、600和800W 功率下加热 10min；考察微波功率对提取结果的影响。

由图5可知，随着微波功率的增加，原花青素提取量呈上升再下降趋势，当功率为400W 时，原花青素提取率最高，曲线达到最高点。微波功率过高，一些活性成分会被破坏。

3．2 正交实验

3．2．1 正交试验设计为优选出醇提的最佳工艺条件，在上述单因素试验所得数据的基础上，用L9(34)正交表，以 原花青素得率为评价指标，对影响原花青素提取效果的因素：微波功率、乙醇浓度、提取时间等因素进行考察，因素水平见表1，试验安排见表2。

3．2．2 正交试验结果精密称取蚕豆皮5．Og 9份，按表2 安排提取，按2．2．2项下方法制备样品溶液并测定原花青素含量，正交试验结果见表2，方差分析见表3。

方差分析表明，因素的重要性依次为C>B>A，微波功率和料液比对原花青素的提取有显著影响，提取时间有一定影响。优选出的工艺为：A2B2C3，即提取时间10min，微波功率400W，料液比为1：15。

3．3 提取次数的确定

分别取5．0g药粉，在上述已选取的最佳提取条件下，连续提取5次，结果如图6所示。

由图6可知，随着提取次数增加，原花青素的提取量累计增加。当提取次数大于3时，曲线趋势已接近平缓，即原花青素提取量的增加已不明显。从节省溶剂和时间考虑，确定提取次数为3次。

3．4 验证试验

在选取的最佳提取条件下，对蚕豆皮中原花青素连续提取3次，测定，得原花青素含量为2．32％(RSD=1．2％ ， = 3)。

4 讨论

4．1 本实验研究了微波法提取蚕豆皮中原花青素的工艺条件，考察了微波输出功率、溶剂浓度、微波加热时间、料液比等重要工艺参数对原花青素收率的影响，微波法提取蚕豆皮中原花青素的最佳生产工艺条件为：使用50％ 乙醇，按料液比1：15将料液混合，在微波输出功率400W下，持续加热10 min，提取3次，100 g蚕豆皮经微波提取可得到 42．2 g粗提物，原花青素得率2．32％。由于粗提物中仍含有一些水溶性大分子的杂质如果胶和糖类，还有鞣质、有机酸等，它们会影响到蚕豆皮中原花青素的精制，故今后需要对其中原花青素的分离纯化做进一步的研究。

4．2 微波法是一种以溶液内的分子、离子接受微波辐射获得能量而迅速升温的加热方式，具有快速加热的优点，减少了有效成分在高温下的受热时间，对于热敏性物质的提取是十分有利的，且符合社会的节能环保要求。

4．3 本研究为产业化生产蚕豆原花青素提供了技术支撑，对蚕豆的深层次开发利用创造了十分有利的条件。

[ Last edited by bear2007 on 2010-5-4 at 13:33 ]
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3楼2010-05-04 13:32:41
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