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zzw1221

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】热激法和电转化法 已有7人参与

做一个100多kb 的克隆测序,利用transposon 插入的方法,插入序列不同的位点,准备测序。用热激法转化做了两次培养不出来,对于这么长的测序是不是电转化法好点,欢迎有经验的同仁进来讨论,谢谢
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yyydyjsgxb

铁虫 (初入文坛)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by zzw1221 at 2010-04-29 16:54:46:
做一个100多kb 的克隆测序,利用transposon 插入的方法,插入序列不同的位点,准备测序。用热激法转化做了两次培养不出来,对于这么长的测序是不是电转化法好点,欢迎有经验的同仁进来讨论,谢谢

序列大了吧
Life is a promise, fulfill it.
2楼2010-04-30 00:50:18
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塞外雨

金虫 (著名写手)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
是100kb还是100bp啊,好大的片段啊
只想找到关心我、在我犹豫时能给我判断的人
3楼2010-04-30 09:37:51
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marc0907

金虫 (小有名气)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
片段好大啊!
4楼2010-04-30 09:50:39
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liyong1981

金虫 (正式写手)


★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
俺最多转的有十几K,哥们,你的这么大啊,大肠杆菌会撑死的~
5楼2010-04-30 10:02:13
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zzw1221

木虫 (著名写手)

呵呵,谢谢,我的是的100多kb ,不至于撑死吧,
6楼2010-04-30 10:09:29
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liyong1981

金虫 (正式写手)


★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
那还是电转吧 ,
7楼2010-04-30 10:41:32
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liyong1981

金虫 (正式写手)


你能介绍下你的怎么做的么》?transposon 什么意思,学习学习,谢谢
8楼2010-04-30 10:42:25
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欣如止水

金虫 (小有名气)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
好像在一篇文献中看到过,大片段的用cosmid转化
9楼2010-04-30 11:23:59
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zzw1221

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by liyong1981 at 2010-04-30 10:42:25:
你能介绍下你的怎么做的么》?transposon 什么意思,学习学习,谢谢

其实对这种大的一家族的基因包含各个位点分类的,未知序列因为直接测序没有引物,而且测的长度有限,所以才有插入转化子,在序列上可以插入不同的位点,根据然后根据插入转化子的引物。加上相应的载体固定引物进行测序,这样不同位点的插入得到不同的克隆,进行测序,然后拼接和剪切,对有GAP的地方设计引物连接再测序,你挑去的克隆越多样本越大测的越详细,拼接越简单。原理是这样的,是可以代替亚克隆的一种测序手段,相对高效吧,呵呵,大家交流交流不错
10楼2010-05-01 02:39:17
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