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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 【求助/交流】热激法和电转化法
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zzw1221

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】热激法和电转化法 已有7人参与

做一个100多kb 的克隆测序，利用transposon 插入的方法，插入序列不同的位点，准备测序。用热激法转化做了两次培养不出来，对于这么长的测序是不是电转化法好点，欢迎有经验的同仁进来讨论，谢谢
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1楼 2010-04-29 16:54:46
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zzw1221

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by liyong1981 at 2010-04-30 10:42:25:
你能介绍下你的怎么做的么》？transposon 什么意思，学习学习，谢谢

其实对这种大的一家族的基因包含各个位点分类的，未知序列因为直接测序没有引物，而且测的长度有限，所以才有插入转化子，在序列上可以插入不同的位点，根据然后根据插入转化子的引物。加上相应的载体固定引物进行测序，这样不同位点的插入得到不同的克隆，进行测序，然后拼接和剪切，对有GAP的地方设计引物连接再测序，你挑去的克隆越多样本越大测的越详细，拼接越简单。原理是这样的，是可以代替亚克隆的一种测序手段，相对高效吧，呵呵，大家交流交流不错
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10楼2010-05-01 02:39:17
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yyydyjsgxb

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by zzw1221 at 2010-04-29 16:54:46:
做一个100多kb 的克隆测序，利用transposon 插入的方法，插入序列不同的位点，准备测序。用热激法转化做了两次培养不出来，对于这么长的测序是不是电转化法好点，欢迎有经验的同仁进来讨论，谢谢

序列大了吧
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Life is a promise, fulfill it.
2楼2010-04-30 00:50:18
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塞外雨

金虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是100kb还是100bp啊，好大的片段啊
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只想找到关心我、在我犹豫时能给我判断的人
3楼2010-04-30 09:37:51
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liyong1981

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
俺最多转的有十几K，哥们，你的这么大啊，大肠杆菌会撑死的～
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5楼2010-04-30 10:02:13
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