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泡泡9706银虫 (小有名气)
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[交流]
【求助/交流】离子交换层析 已有4人参与
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| 我异源表达的目的蛋白等电点预测为9，粗酶液上阴离子交换柱，用ph 7.5的缓冲液，目的蛋白在穿透峰里。我想换用阳离子交换柱，可是用了20mM ph 5的醋酸缓冲液，ph 7的磷酸缓冲液，所有的蛋白都不挂柱，都在穿透峰里，试了好多柱子，强阳的，弱阳的，预装的，自己装的，都是这个情况，想请教高手，会是什么原因呢？ |
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泡泡9706
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4楼2010-04-29 14:13:48
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泡泡9706(金币+1): 2010-04-29 14:15
scelab(金币+3):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-04-30 15:52
泡泡9706(金币+1): 2010-04-29 14:15
scelab(金币+3):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-04-30 15:52
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偶的蛋白预测PI为8.8-9.0，最初的时候高聚不挂柱，后来想办法解聚了。在pH6.5的MES中挂在Resource S柱上，纯化的效果还是不错的。 考虑你的蛋白是不是也是高聚状态，如果是的话不挂柱也正常了。有几个半胱氨酸？有的话要加入β-巯基乙醇或者DTT，防止形成错误的二硫键；是否结合底物会有较强的构象改变，如果是可以考虑加入底物，稳定结构。 多对你蛋白的性质进行了解，然后尝试。 有填料建议使用小柱子做预实验。 |
3楼2010-04-29 12:15:32
泡泡9706
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5楼2010-04-29 14:17:05
