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泡泡9706

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】离子交换层析 已有4人参与

我异源表达的目的蛋白等电点预测为9,粗酶液上阴离子交换柱,用ph 7.5的缓冲液,目的蛋白在穿透峰里。我想换用阳离子交换柱,可是用了20mM ph 5的醋酸缓冲液,ph 7的磷酸缓冲液,所有的蛋白都不挂柱,都在穿透峰里,试了好多柱子,强阳的,弱阳的,预装的,自己装的,都是这个情况,想请教高手,会是什么原因呢?
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your2007

至尊木虫 (著名写手)

★ ★
lstt09nk(金币+2): 2010-04-28 20:21
泡泡9706(金币+1): 2010-04-29 14:11
建议你还是用阳柱,除非你的酶最适pH比9还要高,那就可以用阴柱,其实这个还是要靠摸索的,别人提供的不一定可行。
PS :不知道你的蛋白表达量如何,柱子性能如何,梯度洗脱条件如何,既然有填料,你可以用小管先做预实验,不要灰心(觉得你也没有做太多尝试)祝好!
爱人者被爱,敬人者人敬
2楼2010-04-28 19:46:32
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your2007

至尊木虫 (著名写手)

★ ★ ★
泡泡9706(金币+2): 2010-04-30 14:53
scelab(金币+3):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-04-30 15:52
引用回帖:
Originally posted by 泡泡9706 at 2010-04-29 14:13:48:


谢谢!我的酶最适ph在酸性,表达量不高,不带标签。我很奇怪的是,我的酶液中杂蛋白很多,目的蛋白很少,但是上阳离子柱的话,ph都降到5了,还是所有的蛋白都不挂柱,是操作的时候要注意什么问题吗?我上的样 ...

你说的这种情况我还没有遇到过,再怎么样不至于杂蛋白也挂不住吧,你先要排除掉柱子本身没有问题,如果这个有问题那就没辙了,如果没有问题的话,看来你要尝试另外的纯化途径了。目的蛋白大小应该是已知的了,你看能不能先凝胶过滤一下,再尝试一下。
爱人者被爱,敬人者人敬
6楼2010-04-29 15:30:33
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