24小时热门版块排行榜    

查看: 2551  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

王雨云

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】真菌的基因克隆与表达 已有6人参与

真菌基因克隆后在酵母中表达的话,是不是都要去除内含子?看文章一般都是通过RT-PCR获得cDNA,然后再做相应的表达。我现在在做一株产纤维素酶真菌的内切酶基因的克隆表达,我直接以总DNA为模板扩增的内切酶基因,测序结果跟网上公布的相应内切酶基因完全一样,然后我就做了后续的构建表达载体,在酵母中表达等相关内容,目前刚构建好表达载体。现在才发现我没有去处内含子,这样是不是不可行的,请教高手解疑了。急切等待解疑,谢谢!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaohaozi9876

铁虫 (小有名气)

必须去除内含子,网上的序列不能完全相信

你必须提取rna,泡一下pcr,看有没有差异,有差异的话,你就得从头开始做了。

[ Last edited by xiaohaozi9876 on 2012-7-19 at 12:15 ]
Onceinamoment,wethinkoneselfgrowup,oneday,wefinallyfound...
8楼2012-07-19 12:13:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
没有做过,可能有点复杂,提RNA反转录吧!
关注中。。。
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
2楼2010-04-27 17:58:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangquanju

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-04-27 22:47
你查过你这个基因的基因组序列吗,可能你的基因里面根本没有内含子,比如酿酒酵母基因组中只有4%的编码基因含有小的内含子。
所以不要着急,建议把这个基因的基因组序列找到,因为你与网上预测的序列比对正确的话,应该就是这种情况
4楼2010-04-27 20:47:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王雨云

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by xiangquanju at 2010-04-27 20:47:26:
你查过你这个基因的基因组序列吗,可能你的基因里面根本没有内含子,比如酿酒酵母基因组中只有4%的编码基因含有小的内含子。
所以不要着急,建议把这个基因的基因组序列找到,因为你与网上预测的序列比对正确的话 ...

也就是说通过cds序列确定我所克隆的基因是不是全长,有没有内含子。我现在得到的基因是根据网上公布的来源于同一种真菌的内切酶的mRNA设计的引物,以总DNA为模板扩增而来的基因,测序结果跟他公布的序列一样,但这个公布的基因序列好像不太确定是不是全长(作者没有做相关的文章),一般真菌基因没有内含子的几率较小,那我不是要通过3'和5'race扩全长cds呀,感觉思路混乱了。
5楼2010-04-28 10:57:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 5/250 2026-08-31 14:40 by hahaboy
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 能否申诉? +6 echo8914667 2026-08-30 7/350 2026-08-31 08:41 by kingkocxr
[基金申请] 面上意见出来了 +10 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 19/950 2026-08-31 08:01 by blueearth171
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +6 gdd2018 2026-08-28 11/550 2026-08-30 08:58 by 超级无敌华子
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
信息提示
请填处理意见