24小时热门版块排行榜    

查看: 2506  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

王雨云

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】真菌的基因克隆与表达 已有6人参与

真菌基因克隆后在酵母中表达的话,是不是都要去除内含子?看文章一般都是通过RT-PCR获得cDNA,然后再做相应的表达。我现在在做一株产纤维素酶真菌的内切酶基因的克隆表达,我直接以总DNA为模板扩增的内切酶基因,测序结果跟网上公布的相应内切酶基因完全一样,然后我就做了后续的构建表达载体,在酵母中表达等相关内容,目前刚构建好表达载体。现在才发现我没有去处内含子,这样是不是不可行的,请教高手解疑了。急切等待解疑,谢谢!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangquanju

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-04-27 22:47
你查过你这个基因的基因组序列吗,可能你的基因里面根本没有内含子,比如酿酒酵母基因组中只有4%的编码基因含有小的内含子。
所以不要着急,建议把这个基因的基因组序列找到,因为你与网上预测的序列比对正确的话,应该就是这种情况
4楼2010-04-27 20:47:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
没有做过,可能有点复杂,提RNA反转录吧!
关注中。。。
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
2楼2010-04-27 17:58:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王雨云

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by xiangquanju at 2010-04-27 20:47:26:
你查过你这个基因的基因组序列吗,可能你的基因里面根本没有内含子,比如酿酒酵母基因组中只有4%的编码基因含有小的内含子。
所以不要着急,建议把这个基因的基因组序列找到,因为你与网上预测的序列比对正确的话 ...

也就是说通过cds序列确定我所克隆的基因是不是全长,有没有内含子。我现在得到的基因是根据网上公布的来源于同一种真菌的内切酶的mRNA设计的引物,以总DNA为模板扩增而来的基因,测序结果跟他公布的序列一样,但这个公布的基因序列好像不太确定是不是全长(作者没有做相关的文章),一般真菌基因没有内含子的几率较小,那我不是要通过3'和5'race扩全长cds呀,感觉思路混乱了。
5楼2010-04-28 10:57:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 王雨云 at 2010-04-28 10:57:09:

也就是说通过cds序列确定我所克隆的基因是不是全长,有没有内含子。我现在得到的基因是根据网上公布的来源于同一种真菌的内切酶的mRNA设计的引物,以总DNA为模板扩增而来的基因,测序结果跟他公布的序列一样,但 ...

感觉你这个不用做RACE,首先你用基因组获得了基因序列,这个序列存在两种情况,包含内含子或者不包含,现在你跟网上公布的mRNA序列比对了,是一致的,那么基本可以确定是不包含内含子的。

如果你担心网上公布的结果不准确,那么你可以提取总RNA,并且一定要将DNA用DNA酶消化完全,之后再用你的引物扩增mRNA的全长,克隆测序,比对一下和之前的结果是否一致,确定是否包含内含子
6楼2010-04-28 13:30:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +17 kkkl_v 2026-08-19 18/900 2026-08-25 09:41 by windflowerwy
[基金申请] 我面上完蛋了 +13 且听虎啸 2026-08-20 14/700 2026-08-25 09:10 by mrkang
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +7 炎黄贵胄 2026-08-22 8/400 2026-08-25 08:48 by ZJTJZ
[基金申请] 明天应该可查了!? +5 chengyan1220 2026-08-23 5/250 2026-08-24 23:28 by 我4大白菜
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +7 scalable 2026-08-24 7/350 2026-08-24 23:01 by anata1209
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +21 koalala 2026-08-24 24/1200 2026-08-24 19:25 by 家与远方
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +17 羊腰板 2026-08-21 19/950 2026-08-24 16:52 by iaeyuan
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 21/1050 2026-08-24 14:21 by refreshing11
[基金申请] 估计是周四 +4 archvillain 2026-08-18 4/200 2026-08-24 13:53 by zzuzxg
[基金申请] 朋友圈看到的 +7 wangzilk 2026-08-18 9/450 2026-08-24 10:50 by cmrandy
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 17/850 2026-08-24 10:20 by echo8914667
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
请填处理意见