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王雨云

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】真菌的基因克隆与表达已有6人参与

真菌基因克隆后在酵母中表达的话,是不是都要去除内含子?看文章一般都是通过RT-PCR获得cDNA,然后再做相应的表达。我现在在做一株产纤维素酶真菌的内切酶基因的克隆表达,我直接以总DNA为模板扩增的内切酶基因,测序结果跟网上公布的相应内切酶基因完全一样,然后我就做了后续的构建表达载体,在酵母中表达等相关内容,目前刚构建好表达载体。现在才发现我没有去处内含子,这样是不是不可行的,请教高手解疑了。急切等待解疑,谢谢!
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yujiaping1

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 王雨云 at 2010-04-28 10:57:09:

也就是说通过cds序列确定我所克隆的基因是不是全长,有没有内含子。我现在得到的基因是根据网上公布的来源于同一种真菌的内切酶的mRNA设计的引物,以总DNA为模板扩增而来的基因,测序结果跟他公布的序列一样,但 ...

感觉你这个不用做RACE,首先你用基因组获得了基因序列,这个序列存在两种情况,包含内含子或者不包含,现在你跟网上公布的mRNA序列比对了,是一致的,那么基本可以确定是不包含内含子的。

如果你担心网上公布的结果不准确,那么你可以提取总RNA,并且一定要将DNA用DNA酶消化完全,之后再用你的引物扩增mRNA的全长,克隆测序,比对一下和之前的结果是否一致,确定是否包含内含子
6楼2010-04-28 13:30:00
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