应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请大家帮我分析下原因 关于原核表达
101/1返回列表
查看: 625  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

pwj

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请大家帮我分析下原因 关于原核表达 已有6人参与

大家好！请高手帮忙分析下
我构建了一个PET30a表达载体，经过酶切、PCR都已经验证了。而且基因编码也没问题，但最近最诱导时，OD600为0.6后，加入IPTG就不怎么长了，而且无目的蛋白的表达，这是为什么啊？

我都诱导4小时后加SDS上样缓冲液，煮5分钟，然后上样

[ Last edited by pwj on 2010-4-9 at 21:11 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2010-04-09 21:05:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

DNAhelix

银虫 (著名写手)
★
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-04-10 12:04
蛋白不表达问题真不好说。
1、用其他重组表达质粒测试下表达菌及操作有没有问题。
2、切换其它可表达蛋白测试下你的质粒或目的蛋白有没有问题。
赞一下(1人) 回复此楼
智慧活法：不生气，不计较！
2楼2010-04-09 22:45:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mwgyanchu

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-04-10 12:05
首先你用的表达菌株是什么？加入的IPTG的量与诱导的条件都是影响蛋白表达的关键因素。
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2010-04-09 23:19:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pwj

银虫 (小有名气)
我用的BL21（DE3）  IPTG浓度分别是0.1、0.4、0.8、1.0  诱导4小时就是不表达
赞一下 回复此楼
4楼2010-04-10 18:51:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lingshao405

金虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-04-11 10:36
可以试试BL21(DE3)pLyss
赞一下(2人) 回复此楼
加油，加加油！
5楼2010-04-10 20:23:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mwgyanchu

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-04-11 10:36
楼主，要不你可以考虑换成Rosetta菌株，另外诱导的温度也要考虑。
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2010-04-10 21:02:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pwj

银虫 (小有名气)
请问有人有Rosetta系列菌株吗？我刚看了我的基因1459个氨基酸
有17个稀有密码子  影响大吗？
赞一下 回复此楼
7楼2010-04-10 22:09:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

acaifeng

银虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
表达量较少时蛋白胶上看不见明显的条带，可以做western blot检测一下。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2010-04-12 09:12:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pwj

银虫 (小有名气)
恩！谢谢各位了！
回复此楼
9楼2010-04-12 11:23:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dy_414

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1.IPTG的浓度是否适合
2.煮5min貌似有点短，我都是煮半小时的
赞一下(1人) 回复此楼
我坚信，rp是攒出来的
10楼2010-04-12 11:30:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 pwj 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0856材料专硕353求调剂 +4 NIFFFfff 2026-03-20 4/200 2026-03-22 09:49 by 2026paper
[考研] 生物学一志愿985，分数349求调剂 +4 zxts12 2026-03-21 4/200 2026-03-22 07:20 by ilovexiaobin
[考研] 286分人工智能专业请求调剂愿意跨考！ +4 lemonzzn 2026-03-17 8/400 2026-03-21 22:49 by lemonzzn
[考研] 资源与环境 调剂申请(333分) +5 holy J 2026-03-21 5/250 2026-03-21 22:42 by Catalysis25
[考研] 280求调剂 +11 咕噜晓晓 2026-03-18 12/600 2026-03-21 22:40 by ACS Nano——
[考研] 311求调剂 +13 冬十三 2026-03-15 14/700 2026-03-21 22:10 by peike
[考研] 297求调剂 +11 戏精丹丹丹 2026-03-17 12/600 2026-03-21 17:47 by ColorlessPI
[考研] 能源材料化学课题组招收硕士研究生8-10名 +5 脱颖而出 2026-03-16 15/750 2026-03-21 10:16 by 脱颖而出
[考研] 306求调剂 +4 chuanzhu川烛 2026-03-18 4/200 2026-03-21 08:25 by laoshidan
[考研] 材料工程（专）一志愿985 初试335求调剂 +3 hiloiy 2026-03-17 4/200 2026-03-21 03:04 by JourneyLucky
[考研] 324分 085600材料化工求调剂 +4 llllkkkhh 2026-03-18 4/200 2026-03-21 01:24 by JourneyLucky
[考研] 295复试调剂 +8 简木ChuFront 2026-03-19 8/400 2026-03-20 20:44 by zhukairuo
[考研] 一志愿西安交通大学 学硕 354求调剂211或者双一流 +3 我想要读研究生 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:13 by JourneyLucky
[考研] 085410人工智能专硕317求调剂（0854都可以） +4 xbxudjdn 2026-03-18 4/200 2026-03-20 09:07 by 不168
[考研] 081700化工学硕调剂 +3 【1】 2026-03-16 3/150 2026-03-19 23:40 by edmund7
[考研] 0703化学调剂 +4 18889395102 2026-03-18 4/200 2026-03-19 16:13 by 30660438
[考研] 344求调剂 +6 knight344 2026-03-16 7/350 2026-03-18 20:13 by walc
[考研] 085601专硕，总分342求调剂，地区不限 +5 share_joy 2026-03-16 5/250 2026-03-18 14:48 by haxia
[考研] 0854可跨调剂，一作一项核心论文五项专利，省、国级证书40+数一英一287 +8 小李0854 2026-03-16 8/400 2026-03-18 14:35 by 搏击518
[考博] 26申博 +4 八6八68 2026-03-16 4/200 2026-03-17 13:00 by 轻松不少随
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭