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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR产物
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huangqihong

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR产物

请教一下，我设计了一对Amp特异性的引物，位于Amp抗性基因的内部，引物如下：
F：5’-CCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGC-3’
R：5’-GTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCAT-3’
但是用这对引物做PCR，无论用什么模板（水，不相关的DNA片段，质粒，基因组），不管它们含不含该基因，最后都能扩增出来一条带，而且和目的条带大小一样，我用过不同的退火温度（48°-62°）也都能扩增出来那条带，梯度不明显，我用的是EasyTaq（transgen）酶，不知道什么原因，请大家给点意见，谢谢！
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1楼 2010-03-26 08:21:16
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gaozx123

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+3): 2010-03-26 08:33
水都能扩出来的话，是不是水污染了，也就是你扩增补加的水以及你稀释引物的水可能都污染了，你试一下用超纯水，灭菌121°，30min 灭两次；
还有一种方法就是换一下手气，换个人做，当时我们实验室的一个同门跟你一样，水都能扩出来，可是换做师妹做了一次，就没有扩出来，好多实验室都有这种情况，难道是自身携带的？
你试一下，祝你好运
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2楼2010-03-26 08:32:29
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wbfree

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
确实有点怪，我们实验室也是经常出现这怪事，解决不了。
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3楼2010-03-26 10:04:53
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liby

铜虫 (初入文坛)
把体系都换一遍再做
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4楼2010-03-26 11:48:15
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amilie030312

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 2010-03-28 11:10
如果用水都能扩增出来东西那不是耗材污染了或者水污染了或者引物污染了，反正所有的东西换一遍，如果还是水能扩出来那就是气溶胶污染了，那就搬个地方加样做PCR吧，你们实验室除非整体DNA消毒，否则咋扩咋有。
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5楼2010-03-26 12:22:15
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amilie030312

金虫 (正式写手)
★ ★
司马诸葛(金币+2): 2010-03-26 15:40
如果最终确定是污染了试剂引起的那还提示你一点，就是你们实验室整体操作上有人不是每次换枪头的，并且在不换枪头的情况下还没悬臂加样，这样就导致了试剂污染。
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6楼2010-03-26 12:23:50
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Entrez1110

★
司马诸葛(金币+1): 2010-03-26 15:40
应该是污染了。
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7楼2010-03-26 13:38:42
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tuodecai

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可能是你的试剂有污染了  可以换下 酶、引物、、、试下
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8楼2010-03-26 17:06:54
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
★
350784478(金币+1): 2010-03-26 18:19
一般的酶都是重组酶，来自于大肠杆菌，而且有抗性基因，所以最大的原因就是酶！

其次不能排除你的操作原因——无菌，所以你要到超净台里边去加样，因为有可能你们的实验室有大量杂菌的气溶胶
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9楼2010-03-26 18:07:22
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huangqihong

铁虫 (小有名气)
感谢各位的指教，学习了，呵呵！
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10楼2010-03-28 09:08:14
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