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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR产物
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huangqihong

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR产物

请教一下，我设计了一对Amp特异性的引物，位于Amp抗性基因的内部，引物如下：
F：5’-CCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGC-3’
R：5’-GTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCAT-3’
但是用这对引物做PCR，无论用什么模板（水，不相关的DNA片段，质粒，基因组），不管它们含不含该基因，最后都能扩增出来一条带，而且和目的条带大小一样，我用过不同的退火温度（48°-62°）也都能扩增出来那条带，梯度不明显，我用的是EasyTaq（transgen）酶，不知道什么原因，请大家给点意见，谢谢！
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1楼 2010-03-26 08:21:16
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amilie030312

金虫 (正式写手)
★ ★
司马诸葛(金币+2): 2010-03-26 15:40
如果最终确定是污染了试剂引起的那还提示你一点，就是你们实验室整体操作上有人不是每次换枪头的，并且在不换枪头的情况下还没悬臂加样，这样就导致了试剂污染。
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6楼2010-03-26 12:23:50
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gaozx123

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+3): 2010-03-26 08:33
水都能扩出来的话，是不是水污染了，也就是你扩增补加的水以及你稀释引物的水可能都污染了，你试一下用超纯水，灭菌121°，30min 灭两次；
还有一种方法就是换一下手气，换个人做，当时我们实验室的一个同门跟你一样，水都能扩出来，可是换做师妹做了一次，就没有扩出来，好多实验室都有这种情况，难道是自身携带的？
你试一下，祝你好运
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2楼2010-03-26 08:32:29
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wbfree

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
确实有点怪，我们实验室也是经常出现这怪事，解决不了。
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3楼2010-03-26 10:04:53
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liby

铜虫 (初入文坛)
把体系都换一遍再做
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4楼2010-03-26 11:48:15
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