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huangqihong

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR产物

请教一下,我设计了一对Amp特异性的引物,位于Amp抗性基因的内部,引物如下:
F:5’-CCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGC-3’
R:5’-GTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCAT-3’
但是用这对引物做PCR,无论用什么模板(水,不相关的DNA片段,质粒,基因组),不管它们含不含该基因,最后都能扩增出来一条带,而且和目的条带大小一样,我用过不同的退火温度(48°-62°)也都能扩增出来那条带,梯度不明显,我用的是EasyTaq(transgen)酶,不知道什么原因,请大家给点意见,谢谢!
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tuodecai

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可能是你的试剂有污染了  可以换下 酶、引物、、、试下
8楼2010-03-26 17:06:54
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