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huangqihong

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR产物

请教一下,我设计了一对Amp特异性的引物,位于Amp抗性基因的内部,引物如下:
F:5’-CCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGC-3’
R:5’-GTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCAT-3’
但是用这对引物做PCR,无论用什么模板(水,不相关的DNA片段,质粒,基因组),不管它们含不含该基因,最后都能扩增出来一条带,而且和目的条带大小一样,我用过不同的退火温度(48°-62°)也都能扩增出来那条带,梯度不明显,我用的是EasyTaq(transgen)酶,不知道什么原因,请大家给点意见,谢谢!
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silicare

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350784478(金币+1): 2010-03-26 18:19
一般的酶都是重组酶,来自于大肠杆菌,而且有抗性基因,所以最大的原因就是酶!

其次不能排除你的操作原因——无菌,所以你要到超净台里边去加样,因为有可能你们的实验室有大量杂菌的气溶胶
9楼2010-03-26 18:07:22
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gaozx123

金虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+3): 2010-03-26 08:33
水都能扩出来的话,是不是水污染了,也就是你扩增补加的水以及你稀释引物的水可能都污染了,你试一下用超纯水,灭菌121°,30min 灭两次;
还有一种方法就是换一下手气,换个人做,当时我们实验室的一个同门跟你一样,水都能扩出来,可是换做师妹做了一次,就没有扩出来,好多实验室都有这种情况,难道是自身携带的?
你试一下,祝你好运
2楼2010-03-26 08:32:29
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wbfree

铜虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
确实有点怪,我们实验室也是经常出现这怪事,解决不了。
3楼2010-03-26 10:04:53
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liby

铜虫 (初入文坛)

把体系都换一遍再做
4楼2010-03-26 11:48:15
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