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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR产物
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huangqihong

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR产物

请教一下，我设计了一对Amp特异性的引物，位于Amp抗性基因的内部，引物如下：
F：5’-CCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGC-3’
R：5’-GTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCAT-3’
但是用这对引物做PCR，无论用什么模板（水，不相关的DNA片段，质粒，基因组），不管它们含不含该基因，最后都能扩增出来一条带，而且和目的条带大小一样，我用过不同的退火温度（48°-62°）也都能扩增出来那条带，梯度不明显，我用的是EasyTaq（transgen）酶，不知道什么原因，请大家给点意见，谢谢！
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1楼 2010-03-26 08:21:16
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
★
350784478(金币+1): 2010-03-26 18:19
一般的酶都是重组酶，来自于大肠杆菌，而且有抗性基因，所以最大的原因就是酶！

其次不能排除你的操作原因——无菌，所以你要到超净台里边去加样，因为有可能你们的实验室有大量杂菌的气溶胶
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9楼2010-03-26 18:07:22
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gaozx123

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+3): 2010-03-26 08:33
水都能扩出来的话，是不是水污染了，也就是你扩增补加的水以及你稀释引物的水可能都污染了，你试一下用超纯水，灭菌121°，30min 灭两次；
还有一种方法就是换一下手气，换个人做，当时我们实验室的一个同门跟你一样，水都能扩出来，可是换做师妹做了一次，就没有扩出来，好多实验室都有这种情况，难道是自身携带的？
你试一下，祝你好运
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2楼2010-03-26 08:32:29
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wbfree

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
确实有点怪，我们实验室也是经常出现这怪事，解决不了。
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3楼2010-03-26 10:04:53
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liby

铜虫 (初入文坛)
把体系都换一遍再做
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4楼2010-03-26 11:48:15
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