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04090023

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】竞争性ELISA 竞争孔比稀释孔OD值高 已有2人参与

待检测物质是小分子半抗原,将其与KLH、OVA等大分子载体蛋白偶联后制备免疫抗原。之后制备单克隆抗体,但是最近在检测抗体特异性的过程中遇到困难。用竞争性ELISA方法,将小分子抗原与抗体孵育后检测其OD值,同时做抗体相同稀释倍数的对照,结果发现竞争性的孔OD值居然比对照还高!!真悲剧,实在是想不通,求各位大侠指点啊!!!

求助求助!!!

PS:同时做阴性孔和空白对照孔,OD值都在0.09以下,ELISA体系应该没有问题吧~~~~
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gydgs033

金虫 (小有名气)


amisking(金币+1): 2010-03-28 14:36
04090023(金币+5): 2010-03-30 14:34
你做竞争法为何阴性对照OD在0.09一下??,至少要2.0以上吧!
2楼2010-03-28 10:25:17
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gydgs033

金虫 (小有名气)

请问竞争OD和对照OD具体是多少??
3楼2010-03-28 10:29:59
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04090023

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 04090023 at 2010-03-24 22:10:42:
待检测物质是小分子半抗原,将其与KLH、OVA等大分子载体蛋白偶联后制备免疫抗原。之后制备单克隆抗体,但是最近在检测抗体特异性的过程中遇到困难。用竞争性ELISA方法,将小分子抗原与抗体孵育后检测其OD值,同时 ...

哦,我指的是空白孔在0.09以下。不好意思。对照样的话,不同浓度的孔,差别不一样,我现在想不明白为什么加了抗原的竞争孔,比不加抗原的对照孔OD值还高呢?
4楼2010-03-30 14:29:32
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04090023

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by gydgs033 at 2010-03-28 10:25:17:
你做竞争法为何阴性对照OD在0.09一下??,至少要2.0以上吧!

不好意思啊,我不太会用小木虫的。竞争孔和对照孔的差值大概差值在0.3这样子。希望您能指点!!
5楼2010-03-30 14:33:16
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gydgs033

金虫 (小有名气)

你指得竞争法是不是将偶联的半抗原用1*CB PH=9。6 稀释到合适的浓度  4度过夜包被在96孔板上,甩干,然后加封闭液 37度封闭2小时 甩干。再将将小分子抗原与抗体孵育后加入板孔检测其OD值,同时做抗体相同稀释倍数的对照??是这样吗??
6楼2010-04-25 11:33:59
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Annel

金虫 (小有名气)

你的竞争抗原是用什么溶解的?对照孔用的什么?
7楼2010-04-26 11:07:47
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Annel

金虫 (小有名气)

我做竞争也是很不稳定,竞争孔跟对照孔相差不大,有时候竞争孔还比对照孔大,竞争性很不好,我怀疑我的产生了桥抗体
8楼2010-04-26 11:09:28
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xiudan1225

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
请问楼主,竞争孔OD值比非竞争孔的OD值大的问题解决了吗?我在检测培氟沙星的过程中也遇到了此类问题,实在是太纠结了。。。
9楼2012-03-02 10:37:50
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yougking

铁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
19928588楼: Originally posted by xiudan1225 at 2012-03-02 10:37:50
请问楼主,竞争孔OD值比非竞争孔的OD值大的问题解决了吗?我在检测培氟沙星的过程中也遇到了此类问题,实在是太纠结了。。。

同求,竞争孔OD值比非竞争控OD值大的问题,我在检测一种抗生素的时候遇到了同样的问题,怀疑是不是高小分子浓度导致的,另外小分子稀释液内含有(<0.1%DMSO)
10楼2012-10-10 06:48:06
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