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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】竞争性ELISA 竞争孔比稀释孔OD值高
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04090023

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】竞争性ELISA 竞争孔比稀释孔OD值高 已有2人参与

待检测物质是小分子半抗原，将其与KLH、OVA等大分子载体蛋白偶联后制备免疫抗原。之后制备单克隆抗体，但是最近在检测抗体特异性的过程中遇到困难。用竞争性ELISA方法，将小分子抗原与抗体孵育后检测其OD值，同时做抗体相同稀释倍数的对照，结果发现竞争性的孔OD值居然比对照还高！！真悲剧，实在是想不通，求各位大侠指点啊！！！

求助求助！！！

PS：同时做阴性孔和空白对照孔，OD值都在0.09以下，ELISA体系应该没有问题吧~~~~
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1楼 2010-03-24 22:10:42
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gydgs033

金虫 (小有名气)
你指得竞争法是不是将偶联的半抗原用1*CB PH=9。6 稀释到合适的浓度  4度过夜包被在96孔板上，甩干，然后加封闭液 37度封闭2小时 甩干。再将将小分子抗原与抗体孵育后加入板孔检测其OD值，同时做抗体相同稀释倍数的对照？？是这样吗？？
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6楼2010-04-25 11:33:59
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gydgs033

金虫 (小有名气)
★
amisking(金币+1): 2010-03-28 14:36
04090023(金币+5): 2010-03-30 14:34
你做竞争法为何阴性对照OD在0.09一下？？，至少要2.0以上吧！
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2楼2010-03-28 10:25:17
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gydgs033

金虫 (小有名气)
请问竞争OD和对照OD具体是多少？？
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3楼2010-03-28 10:29:59
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04090023

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 04090023 at 2010-03-24 22:10:42:
待检测物质是小分子半抗原，将其与KLH、OVA等大分子载体蛋白偶联后制备免疫抗原。之后制备单克隆抗体，但是最近在检测抗体特异性的过程中遇到困难。用竞争性ELISA方法，将小分子抗原与抗体孵育后检测其OD值，同时 ...

哦，我指的是空白孔在0.09以下。不好意思。对照样的话，不同浓度的孔，差别不一样，我现在想不明白为什么加了抗原的竞争孔，比不加抗原的对照孔OD值还高呢？
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4楼2010-03-30 14:29:32
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