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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】细胞只长在培养瓶的边上是怎么回事？
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liujiahui

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】细胞只长在培养瓶的边上是怎么回事？

本人现在在养MCF-7，Caco-2细胞。
目前MCF-7的养的不好。请大家帮忙分析一下出了什么问题，多谢！

情形是这样的。
1. MCF-7复苏时，生长正常。
2. Caco-2用和MCF-7同一瓶培养基培养，生长正常。
3. MCF-7复苏后传一次代，细胞形态改变，变的很长。
4. 以前也有遇到细胞变长的情况，重新用一瓶新的培养基情况好转。（但是只用了半瓶的培养基扔掉太浪费了呀 ）
5. 第二词传代，用了15 mL培养基/25 cm2flask。结果细胞只有边上的生长，瓶子中间的细胞死亡或很少。
6. 第二次传代的时候，有两个flask，一个忘记把盖子旋开了，结果，里边的细胞，瓶子中间的细胞仍然活着，只是细胞很长，数量较少。边上的数量多。另一瓶正常旋松盖子的，中央的细胞都死了，边上的数量较多。
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1楼 2010-03-12 02:25:01
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tancf

金虫 (小有名气)
liujiahui(金币+1):多谢交流！ 2010-03-12 12:30
liujiahui(金币+2):多谢交流！ 2010-03-12 12:30
我做细胞实验也是新手，不过一直养MCF-7，说说我的想法，希望对你有帮助。
1.你保的MCF-7以前用的好吗？要是保的时候状态不好的话，以后养就会有点问题。
2.我一直用培养皿养的细胞，用瓶的话，好像是要旋开盖子的。中间没有细胞，可能是细胞贴壁不好了。
3.之前我们实验室也有人养MCF-7，好像用的DMEM的培养基，但是他一直养不起来，后来换了我的培养基就好了。我用的是DMEM/F12培养基，不含酚红，并且血清中激素含量较一般的要低。
4.你的培养基中加了抗生素了吗？要是加了的话不防去掉试试。
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3楼2010-03-12 10:03:01
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beenomics

至尊木虫 (著名写手)

游戏人间的拙劣的造梦师
★
1949stone(金币+1): 2010-03-12 09:24
liujiahui(金币+3):多谢交流！ 2010-03-12 12:29
很奇怪的现象....难道是细胞变异了？
第2点，同一瓶培养基是什么培养基啊？
第3/4点，不行就把培养基分装了，每次拿最新的用
后面就难理解了，既然和透气有关，那时不是CO2的浓度影响细胞
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在深深的迷茫中徘徊
2楼2010-03-12 09:22:45
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liujiahui

木虫 (著名写手)
我也不知道有未变异。
用的EMEM（ATCC），10%胎牛血清（ATCC），一直用这个养的。
灭菌锅坏了，近期内都无法高压。不过，以后遇到这个问题可以考虑分装，hehe。

但是其他细胞长得挺好的呀。
引用回帖:
Originally posted by beenomics at 2010-03-12 09:22:45:
很奇怪的现象....难道是细胞变异了？
第2点，同一瓶培养基是什么培养基啊？
第3/4点，不行就把培养基分装了，每次拿最新的用
后面就难理解了，既然和透气有关，那时不是CO2的浓度影响细胞

[ Last edited by liujiahui on 2010-3-12 at 12:38 ]
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4楼2010-03-12 12:29:31
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liujiahui

木虫 (著名写手)
以前用的都是好的。传代10次以上，可能出现变为梭形，我就会重新复苏。现在用的冻存管都是最初冻得。而且，刚复苏的那次长得是很好的。

我一般都是旋开盖子的，但是可能养的比较多，所以当时恰好有一个忘记旋开了，而忘记旋开的那个活得稍微好一点。但是从培养基的颜色上来开，过于偏碱了，也不是正常的颜色。

血清中为什么有激素呢？

加抗生素了。可以考虑去掉试试。不过，实验室的抗生素是四五年前买的，反复冻融了n次，虽然一直没有长过菌，但是，真不知道还有没有活力。
引用回帖:
Originally posted by tancf at 2010-03-12 10:03:01:
我做细胞实验也是新手，不过一直养MCF-7，说说我的想法，希望对你有帮助。
1.你保的MCF-7以前用的好吗？要是保的时候状态不好的话，以后养就会有点问题。
2.我一直用培养皿养的细胞，用瓶的话，好像是要旋开盖子 ...

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5楼2010-03-12 12:36:26
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