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liujiahui

木虫 (著名写手)

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[交流] 【求助/交流】细胞只长在培养瓶的边上是怎么回事？

本人现在在养MCF-7，Caco-2细胞。
目前MCF-7的养的不好。请大家帮忙分析一下出了什么问题，多谢！

情形是这样的。
1. MCF-7复苏时，生长正常。
2. Caco-2用和MCF-7同一瓶培养基培养，生长正常。
3. MCF-7复苏后传一次代，细胞形态改变，变的很长。
4. 以前也有遇到细胞变长的情况，重新用一瓶新的培养基情况好转。（但是只用了半瓶的培养基扔掉太浪费了呀）
5. 第二词传代，用了15 mL培养基/25 cm2flask。结果细胞只有边上的生长，瓶子中间的细胞死亡或很少。
6. 第二次传代的时候，有两个flask，一个忘记把盖子旋开了，结果，里边的细胞，瓶子中间的细胞仍然活着，只是细胞很长，数量较少。边上的数量多。另一瓶正常旋松盖子的，中央的细胞都死了，边上的数量较多。

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1楼2010-03-12 02:25:01

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liujiahui

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我也不知道有未变异。
用的EMEM（ATCC），10%胎牛血清（ATCC），一直用这个养的。
灭菌锅坏了，近期内都无法高压。不过，以后遇到这个问题可以考虑分装，hehe。

但是其他细胞长得挺好的呀。

引用回帖:

Originally posted by beenomics at 2010-03-12 09:22:45:
很奇怪的现象....难道是细胞变异了？
第2点，同一瓶培养基是什么培养基啊？
第3/4点，不行就把培养基分装了，每次拿最新的用
后面就难理解了，既然和透气有关，那时不是CO2的浓度影响细胞

[ Last edited by liujiahui on 2010-3-12 at 12:38 ]

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4楼2010-03-12 12:29:31

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以前用的都是好的。传代10次以上，可能出现变为梭形，我就会重新复苏。现在用的冻存管都是最初冻得。而且，刚复苏的那次长得是很好的。

我一般都是旋开盖子的，但是可能养的比较多，所以当时恰好有一个忘记旋开了，而忘记旋开的那个活得稍微好一点。但是从培养基的颜色上来开，过于偏碱了，也不是正常的颜色。

血清中为什么有激素呢？

加抗生素了。可以考虑去掉试试。不过，实验室的抗生素是四五年前买的，反复冻融了n次，虽然一直没有长过菌，但是，真不知道还有没有活力。

引用回帖:

Originally posted by tancf at 2010-03-12 10:03:01:
我做细胞实验也是新手，不过一直养MCF-7，说说我的想法，希望对你有帮助。
1.你保的MCF-7以前用的好吗？要是保的时候状态不好的话，以后养就会有点问题。
2.我一直用培养皿养的细胞，用瓶的话，好像是要旋开盖子 ...

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5楼2010-03-12 12:36:26

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