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liujiahui

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】细胞只长在培养瓶的边上是怎么回事?

本人现在在养MCF-7,Caco-2细胞。
目前MCF-7的养的不好。请大家帮忙分析一下出了什么问题,多谢!

情形是这样的。
1. MCF-7复苏时,生长正常。
2. Caco-2用和MCF-7同一瓶培养基培养,生长正常。
3. MCF-7复苏后传一次代,细胞形态改变,变的很长。
4. 以前也有遇到细胞变长的情况,重新用一瓶新的培养基情况好转。(但是只用了半瓶的培养基扔掉太浪费了呀 )
5. 第二词传代,用了15 mL培养基/25 cm2flask。结果细胞只有边上的生长,瓶子中间的细胞死亡或很少。
6. 第二次传代的时候,有两个flask,一个忘记把盖子旋开了,结果,里边的细胞,瓶子中间的细胞仍然活着,只是细胞很长,数量较少。边上的数量多。另一瓶正常旋松盖子的,中央的细胞都死了,边上的数量较多。
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beenomics

至尊木虫 (著名写手)

游戏人间的拙劣的造梦师


1949stone(金币+1): 2010-03-12 09:24
liujiahui(金币+3):多谢交流! 2010-03-12 12:29
很奇怪的现象....难道是细胞变异了?
第2点,同一瓶培养基是什么培养基啊?
第3/4点,不行就把培养基分装了,每次拿最新的用
后面就难理解了,既然和透气有关,那时不是CO2的浓度影响细胞
在深深的迷茫中徘徊
2楼2010-03-12 09:22:45
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tancf

金虫 (小有名气)

liujiahui(金币+1):多谢交流! 2010-03-12 12:30
liujiahui(金币+2):多谢交流! 2010-03-12 12:30
我做细胞实验也是新手,不过一直养MCF-7,说说我的想法,希望对你有帮助。
1.你保的MCF-7以前用的好吗?要是保的时候状态不好的话,以后养就会有点问题。
2.我一直用培养皿养的细胞,用瓶的话,好像是要旋开盖子的。中间没有细胞,可能是细胞贴壁不好了。
3.之前我们实验室也有人养MCF-7,好像用的DMEM的培养基,但是他一直养不起来,后来换了我的培养基就好了。我用的是DMEM/F12培养基,不含酚红,并且血清中激素含量较一般的要低。
4.你的培养基中加了抗生素了吗?要是加了的话不防去掉试试。
3楼2010-03-12 10:03:01
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liujiahui

木虫 (著名写手)

我也不知道有未变异。
用的EMEM(ATCC),10%胎牛血清(ATCC),一直用这个养的。
灭菌锅坏了,近期内都无法高压。不过,以后遇到这个问题可以考虑分装,hehe。

但是其他细胞长得挺好的呀。
引用回帖:
Originally posted by beenomics at 2010-03-12 09:22:45:
很奇怪的现象....难道是细胞变异了?
第2点,同一瓶培养基是什么培养基啊?
第3/4点,不行就把培养基分装了,每次拿最新的用
后面就难理解了,既然和透气有关,那时不是CO2的浓度影响细胞

[ Last edited by liujiahui on 2010-3-12 at 12:38 ]
4楼2010-03-12 12:29:31
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liujiahui

木虫 (著名写手)

以前用的都是好的。传代10次以上,可能出现变为梭形,我就会重新复苏。现在用的冻存管都是最初冻得。而且,刚复苏的那次长得是很好的。

我一般都是旋开盖子的,但是可能养的比较多,所以当时恰好有一个忘记旋开了,而忘记旋开的那个活得稍微好一点。但是从培养基的颜色上来开,过于偏碱了,也不是正常的颜色。

血清中为什么有激素呢?

加抗生素了。可以考虑去掉试试。不过,实验室的抗生素是四五年前买的,反复冻融了n次,虽然一直没有长过菌,但是,真不知道还有没有活力。
引用回帖:
Originally posted by tancf at 2010-03-12 10:03:01:
我做细胞实验也是新手,不过一直养MCF-7,说说我的想法,希望对你有帮助。
1.你保的MCF-7以前用的好吗?要是保的时候状态不好的话,以后养就会有点问题。
2.我一直用培养皿养的细胞,用瓶的话,好像是要旋开盖子 ...

5楼2010-03-12 12:36:26
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tancf

金虫 (小有名气)


liujiahui(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by liujiahui at 2010-03-12 12:36:26:
以前用的都是好的。传代10次以上,可能出现变为梭形,我就会重新复苏。现在用的冻存管都是最初冻得。而且,刚复苏的那次长得是很好的。

我一般都是旋开盖子的,但是可能养的比较多,所以当时恰好有一个忘记旋开 ...

我的实验需要血清的激素要很低,所以用的比较特殊。
多想想,呵呵,问题肯定会解决的。
6楼2010-03-12 13:08:46
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

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优秀版主


liujiahui(金币+1):谢谢参与
说明形态改变是问题已经出现了
7楼2010-03-12 13:25:40
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liujiahui

木虫 (著名写手)

往上托一托。

目前,我还是打开一瓶培养基,只能用半瓶。

把多次剩余的培养液混在一起,养细胞,细胞就死的很惨(根本不是不活的状态,而是一天就死光光了)。即使补充一些血清也没有改善。
8楼2010-08-13 05:03:30
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lywang2008

至尊木虫 (知名作家)

优秀版主优秀版主


liujiahui(金币+1):谢谢参与
学习中,谢谢分享!
9楼2010-08-13 05:38:33
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sdqzsdqz

木虫 (著名写手)


liujiahui(金币+1):谢谢参与
接种的时候没晃均匀了,下次记得十字晃多次点就好了。
10楼2010-08-13 07:11:50
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