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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】纤维素酶活测定
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sipibio

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】纤维素酶活测定

筛选纤维素降解菌时，利用刚果红平板筛选到一些有降解纤维素作用的菌株，但是，在利用DNS法测纤维素酶活时，却测不出酶活，对照组和实验组的颜色和吸光度差不多，这是咋回事啊？测酶活时，需要注意什么问题啊？希望能给予详细的解答，万分感激！
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好好的
1楼 2010-03-10 17:40:30
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王雨云

金虫 (小有名气)
sipibio(金币+1): 2010-03-11 21:25
我也遇到过同样的问题。到目前为止还没找到解决办法，自认为是筛出的菌本身就没有多大的内切酶酶活，之所以有水解圈可能是别的作用
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2楼2010-03-11 13:51:08
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sipibio

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 王雨云 at 2010-03-11 13:51:08:
我也遇到过同样的问题。到目前为止还没找到解决办法，自认为是筛出的菌本身就没有多大的内切酶酶活，之所以有水解圈可能是别的作用

哇，不是吧，我也想到有可能是这个原因，可总不能所有的菌都是这种情况吧？再说好多文献上都普遍用这种方法做的，总不能这么不幸吧，肯定哪有问题
你的发酵时间是几天啊，酶估计后期才能产生！

我正在努力解决！！！
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好好的
3楼2010-03-11 21:28:15
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
sipibio(金币+1): 2010-03-12 18:38
接种量影响产酶；每个真菌都有产酶曲线；DNS法测纤维素酶活是普遍用的方法，已被证明是可行的；真菌在平板上和液体培养时所处条件不同，产酶也不同，降解圈与液体酶活力不成什么比例。但是初筛也只能是遵循某个原则，降解圈是最常用的初筛指标。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
4楼2010-03-11 22:52:25
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墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫
sipibio(金币+1): 2010-03-12 18:46
初筛后的菌株经过摇瓶培养获得较高表达的纤维素酶可能才有能测定的酶活，测酶活时适当延长在最适温度下的反应时间。。。
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仕不可不弘毅，任重而道远
5楼2010-03-12 09:29:22
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sipibio

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2010-03-11 22:52:25:
接种量影响产酶；每个真菌都有产酶曲线；DNS法测纤维素酶活是普遍用的方法，已被证明是可行的；真菌在平板上和液体培养时所处条件不同，产酶也不同，降解圈与液体酶活力不成什么比例。但是初筛也只能是遵循某个原 ...

那是不是应该适当加大接种量啊，我正在尝试首先在种子培养基中扩大培养几天，然后再转接到发酵产酶培养基中，这样也许可以改善一下接种量少的问题。。。

降解菌的大小与酶活确实不成什么比例，但是，存在降解圈是否就能说明该菌株分泌纤维素酶呢,只是有可能酶活低一些？难道存在降解圈也有可能不产纤维素酶吗？
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好好的
6楼2010-03-12 18:43:29
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sipibio

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 墨香若水 at 2010-03-12 09:29:22:
初筛后的菌株经过摇瓶培养获得较高表达的纤维素酶可能才有能测定的酶活，测酶活时适当延长在最适温度下的反应时间。。。

恩，我会尝试一下的，谢谢
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好好的
7楼2010-03-12 18:47:14
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王雨云

金虫 (小有名气)
amisking:可以把这个话题发帖讨论！ 2010-03-16 12:31
sipibio(金币+1): 2010-03-16 22:35
我的疑问是用DNS法测内切酶活力时，有明显的颜色反应（一般测酶活的话对照组经过煮沸后加DNS应该不显色的），但我的实验组和对照组的颜色深浅差不多，且都有比较深上的颜色。对于对照组的处理也用过很多方法，结果还是一样，所以测不出酶活。
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8楼2010-03-16 11:46:55
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
sipibio(金币+1): 2010-03-16 22:37
加大接种量是可行的，但是对于从产生降解圈的真菌中筛选出发酵上清液酶活力较强的一批菌中，没必要扩大培养，因为太耗费时间了。因为如果要比较出最强的真菌，那就应该选用同样的操作，比如同样的培养基、培养条件和接种量（精确到孢子量为10的多少次方个每毫升），而且要比较发酵上清液酶活力曲线，选出产酶高且快的菌株。

有降解圈只表示在平板上培养的时候产酶，至于液体培养产酶量多或者少就难说了。

对照颜色深是表示发酵上清液里含有酶，因为真菌首先产酶降解了培养基里的纤维素产生还原糖摄入碳源才能生长。但是一般还原糖浓度降低之后才是酶活力最高的时候，起码在我的实验里都是这样的。但是如果真菌本来产酶不多，那也有可能一直测不到酶活力。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
9楼2010-03-16 13:24:39
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sipibio

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 王雨云 at 2010-03-16 11:46:55:
我的疑问是用DNS法测内切酶活力时，有明显的颜色反应（一般测酶活的话对照组经过煮沸后加DNS应该不显色的），但我的实验组和对照组的颜色深浅差不多，且都有比较深上的颜色。对于对照组的处理也用过很多方法，结果 ...

我的对照组倒还正常，颜色不深，吸光度挺小的，只是实验组的颜色太浅了
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好好的
10楼2010-03-16 22:37:02
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