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hyw0794

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】我用用ITS引物做出测序结果,如何在NCBI上确定其生物学地位和种属?

  我用用ITS引物做出测序结果,如何鉴定和构建进化树?如何在NCBI上确定其生物学地位?我是做了双向测序,是不是需要正反向拼接了才能blast比对呀?还是单链就可以?哪种处理准确性好呢?
  ITS引物做出测序结果一条是517bp, 另一条534bp,拼接后476bp.请问ITS引物测序的有效碱基数最少是多少?如何知道是?属?种?谢谢大家指导!
       如何获得登录号?
       本人为答谢大家帮助,回答上述问题之一,给予不少于3个金币的奖励。最高15个。


补充:因为我已经使用了NCBI并且也找到了其分类。就是有些地方不是很清楚,望后面回答问题的大侠给予一定分析。谢谢!
1.拼接后476bp是否有效?如何获得登录号?
2.如何给该菌株命名?

[ Last edited by amisking on 2010-3-9 at 21:15 ]
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diaoyuhua

金虫 (小有名气)


1949stone(金币+1): 2010-03-09 20:41
hyw0794(金币+3):他给了进入步骤,没有如何分析问题。不过还是谢谢! 2010-03-09 20:56
把序列输进去,物种选择其他,BLAST就行了
2楼2010-03-09 20:28:25
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hyw0794

木虫 (正式写手)

这个我已经在NCBI中的BLAST做了,能否再提供一些其他方面的吗?谢谢!
3楼2010-03-09 20:52:21
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hyw0794

木虫 (正式写手)

amisking:给你把补充加到一楼。 2010-03-09 21:14
补充:因为我已经使用了NCBI并且也找到了其分类。就是有些地方不是很清楚,望后面回答问题的大侠给予一定分析。谢谢!
1.拼接后476bp是否有效?如何获得登录号?
2.如何给该菌株命名?
4楼2010-03-09 21:02:57
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sdhcy

木虫 (初入文坛)

hyw0794(金币+6): 2010-03-10 10:02
几点提醒:
1.关于ITS引物做出测序结果一条是517bp, 另一条534bp,拼接后476bp.
测序注意事项:
一定要查看原始的测序报告。看看有没有套峰。如果有的话,就要克隆测序了,或者双向测序,再拼接。

关于这方面的文章可以看:
A reason for overlap peaks in direct sequencing of rRNA gene ITS in Pleurotus nebrodensis。 FEMS Microbiol Lett. 2010 Feb 10.

2.关于如何知道是?属?种?
这个需要结合其它数据,如形态、生理生化。
因为genBank中的部分数据的物种定的也不对。原因是,提交信息的人,没有搞对就提交了。而genbank没有办法审查。

可以看看关于genbank数据可信的文章,例如:Can you bank on GenBank?Trends in Ecology & Evolution, Volume 18, Issue 7, 317-319, 1 July 2003
5楼2010-03-10 04:05:19
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hyw0794

木虫 (正式写手)

我送出去测序是双向测序的,然后再拼接后有476bp.有效吗?上面提供的资料,在此谢谢了。
6楼2010-03-10 09:59:30
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hfztim

至尊木虫 (正式写手)

hyw0794(金币+2): 2010-03-21 10:21
1.如何获得登录号?你可以先看看这个
http://www.bioon.com/biology/bioinfo2/78848.shtml
在ncbi主页上按要求一步步填好,提交后他们会发一个回复给你,再等个1个月左右就可以查到你的登录序列啦。
2.你要确定ITS1 5.8S ITS2的界限。这个可以参考数据库中与你类似的种。
7楼2010-03-10 10:21:00
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hyw0794

木虫 (正式写手)

我是用ITS1和ITS4这对引物,所以你认为如何处理,是用测序单链DNA,还是用拼接后的DNA,其中多少说bp有效。谢谢!我上面拼接后是476bp.可以吗?
8楼2010-03-10 10:59:08
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hfztim

至尊木虫 (正式写手)

拼接?是什么意思?是不是所谓的双向测序?我是这样做的:
1.根据公司的双向测序结果进行人工比对,如果正向和反向的反补序列结果一致,就确定你的最终序列啦。(可以使用序列处理在线工具包http://www.bio-soft.net/sms/index.html)
2.到基因库查与你相近物种的ITS1 5.8S ITS2的界限。
9楼2010-03-23 17:00:51
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