应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】蛋白可溶性表达问题。
131/2返回列表12下一页
查看: 985  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 nicknelson 的 1 个金币

nicknelson

至尊木虫 (职业作家)

[交流] 【求助/交流】蛋白可溶性表达问题。

我在试管中0.1mM IPTG, 室温（19℃），150rpm，诱导8h，大概30%在上清表达。

同样的条件，我在500mL锥形瓶摇100mL菌液，结果全在包涵体。

于是我把条件改成0.02/0.05/0.1 mM IPTG三个浓度，室温（19℃），60rpm，诱导8h，结果还是全在沉淀里表达！

请高人指导啊！！！！！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2010-02-27 20:21:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

月月大可

木虫 (著名写手)
★ ★
amisking(金币+2): 2010-02-28 22:27
nicknelson(金币+2):thanks 2010-03-07 17:02
在加入IPTG诱导前把菌液放在冰水混合物中让其充分冷却之后再加入IPTG去诱导。
有书上写降低诱导时的OD值有利于可溶表达，我没有尝试过。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-02-28 09:41:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nicknelson

至尊木虫 (职业作家)
不过我看书上写培养体积越低，确实能增加可溶性表达比例。谢谢！
引用回帖:
Originally posted by 月月大可 at 2010-02-28 09:41:37:
在加入IPTG诱导前把菌液放在冰水混合物中让其充分冷却之后再加入IPTG去诱导。
有书上写降低诱导时的OD值有利于可溶表达，我没有尝试过。

赞一下 回复此楼
3楼2010-02-28 12:10:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Charlie1331

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
amisking(金币+3): 2010-02-28 22:27
nicknelson(金币+2):说的没错，可是有什么建议没？ 2010-03-07 17:02
怀疑在试管里培养时，由于体积小，溶氧差，菌体生长情况应该不好，此时诱导，不会大量表达产生目的蛋白；而在摇瓶中培养，溶氧等各方面都比试管强，菌体生长良好，具有较强的合成能力，而IPTG又是强诱导剂，估计用的也是T7启动子，强上加强，所以产生了包涵体。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2010-02-28 22:09:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guoenwen

金虫 (小有名气)
同意三角瓶培养的时候溶氧不足的说法，我遇到过相似的问题。
赞一下 回复此楼
5楼2010-03-01 08:17:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
nicknelson(金币+2):thanks 2010-03-07 17:03
可溶性表达与否起决定作用的是序列本身，所以有时候你是无论如何也得不得的

但优化条件还是可以得到部分可溶性的

你的条件优化做的还不够，

另外60rpm不好
赞一下 回复此楼
6楼2010-03-01 17:52:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nicknelson

至尊木虫 (职业作家)
我这次又又优化了一次：
IPTG 0.02mM，0.1mM
转速：60，120rpm
体积：5mL，10mL
总共8组，可是这回没有一次上清有表达的。疯了。
引用回帖:
Originally posted by silicare at 2010-03-01 17:52:51:
可溶性表达与否起决定作用的是序列本身，所以有时候你是无论如何也得不得的

但优化条件还是可以得到部分可溶性的

你的条件优化做的还不够，

另外60rpm不好

赞一下 回复此楼
7楼2010-03-01 18:30:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dy_414

木虫 (正式写手)
nicknelson(金币+1):thanks 2010-03-07 17:03
降低IPTG浓度，还有就是低温诱导长时间

另外换一个载体看看吧
赞一下 回复此楼
我坚信，rp是攒出来的
8楼2010-03-02 12:24:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Charlie1331

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by Charlie1331 at 2010-02-28 22:09:10:
怀疑在试管里培养时，由于体积小，溶氧差，菌体生长情况应该不好，此时诱导，不会大量表达产生目的蛋白；而在摇瓶中培养，溶氧等各方面都比试管强，菌体生长良好，具有较强的合成能力，而IPTG又是强诱导剂，估计用 ...

首先呢，根据经验，可以试一下不诱导的情况。由于T7有着较强的本底表达，所以，不诱导，也会有蛋白合成；如果不成，那么就可以查阅一些关于增加膜透性的文章。包涵体形成的原因就有膜向外转运蛋白的能力与其合成能力不相匹配，可适量添加一些表面活性剂处理。
赞一下 回复此楼
9楼2010-03-07 22:18:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
引用回帖:
Originally posted by Charlie1331 at 2010-02-28 22:09:10:
怀疑在试管里培养时，由于体积小，溶氧差，菌体生长情况应该不好，此时诱导，不会大量表达产生目的蛋白；而在摇瓶中培养，溶氧等各方面都比试管强，菌体生长良好，具有较强的合成能力，而IPTG又是强诱导剂，估计用 ...

很好，发酵工程您入门啦！
赞一下 回复此楼
【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
10楼2010-03-08 09:09:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 nicknelson 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 328求调剂，英语六级551，有科研经历 +5 生物工程调剂 2026-03-17 9/450 2026-03-21 23:32 by zhujy1982
[考研] 333求调剂 +5 87639 2026-03-21 7/350 2026-03-21 19:31 by ColorlessPI
[考研] 268求调剂 +9 简单点0 2026-03-17 9/450 2026-03-21 15:37 by lature00
[考研] 材料与化工（0856）304求 B区 调剂 +3 邱gl 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:47 by lature00
[考研] 332求调剂 +3 凤凰院丁真 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:27 by luoyongfeng
[考研] 085700资源与环境308求调剂 +12 墨墨漠 2026-03-18 13/650 2026-03-21 01:42 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华中科技大学，080502，354分求调剂 +5 守候夕阳CF 2026-03-18 5/250 2026-03-21 01:06 by JourneyLucky
[考研] 317求调剂 +5 申子申申 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:26 by JourneyLucky
[考研] 085600材料与化工 +8 安全上岸！ 2026-03-16 8/400 2026-03-20 22:13 by luoyongfeng
[考研] 材料与化工 322求调剂 +4 然11 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:12 by luoyongfeng
[考研] 中南大学化学学硕337求调剂 +3 niko- 2026-03-19 6/300 2026-03-20 21:58 by luoyongfeng
[考研] 求调剂一志愿南京航空航天大学289分 +3 @taotao 2026-03-19 3/150 2026-03-20 21:34 by JourneyLucky
[考研] 353求调剂 +3 拉钩不许变 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:56 by JourneyLucky
[考研] 一志愿吉林大学材料学硕321求调剂 +11 Ymlll 2026-03-18 15/750 2026-03-20 19:40 by 丁丁*
[考研] 求调剂 +3 eation27 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:32 by JourneyLucky
[考研] 招收调剂硕士 +4 lidianxing 2026-03-19 12/600 2026-03-20 12:25 by lidianxing
[考研] 考研求调剂 +3 橘颂. 2026-03-17 4/200 2026-03-17 21:43 by 有只狸奴
[考研] 301求调剂 +4 A_JiXing 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:32 by ruiyingmiao
[硕博家园] 湖北工业大学 生命科学与健康学院-课题组招收2026级食品/生物方向硕士 +3 1喜春8 2026-03-17 5/250 2026-03-17 17:18 by ber川cool子
[考研] 一志愿南京大学，080500材料科学与工程，调剂 +4 Jy? 2026-03-16 4/200 2026-03-17 11:02 by gaoqiong
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭